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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 300bp左右的序列，两端酶切位点相同 能否发生自连
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xiao宁

新虫 (初入文坛)

[求助] 300bp左右的序列，两端酶切位点相同 能否发生自连

最近在构思下一步试验方案 ，但是遇到一个问题：
  我打算扩增启动子以及后面的干扰片段  设计引物时给两端加同样的酶切位点  设计好后 进行PCR扩增 扩增产物经酶切后  与线性载体进行连接
现在有个问题  扩增后的产物经酶切后会发生自连形成300bp左右的环状？
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1楼 2014-03-06 12:19:26
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-06 15:40:13
.............
    不知是否非要这样做。
    如果是，你更需要关心的是载体自连，防止载体自连可以用CIP处理。
    片段就算自连，转化大肠杆菌后，也会被抗性、及大肠杆菌自身的复制机制筛选掉。如果你还是觉得闹心的话。使用PEG-4000（好像是4000）可以抑制环化现象。PEG的作用主要是促进连接反应中的线性连接以及多聚化产生。在Thermo系列的连接酶中都附带有PEG的。但你需要注意的是，可能会有多聚体连入你的载体，因为你300bp实在太小了。
    祝实验顺利
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Let God do with it as He wills
2楼2014-03-06 13:47:20
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