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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xiao宁

新虫 (初入文坛)

[求助] 300bp左右的序列,两端酶切位点相同 能否发生自连

最近在构思下一步试验方案 ,但是遇到一个问题:
  我打算扩增启动子以及后面的干扰片段  设计引物时给两端加同样的酶切位点  设计好后 进行PCR扩增 扩增产物经酶切后  与线性载体进行连接
现在有个问题  扩增后的产物经酶切后会发生自连形成300bp左右的环状?
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-03-06 15:40:13
.............
    不知是否非要这样做。
    如果是,你更需要关心的是载体自连,防止载体自连可以用CIP处理。
    片段就算自连,转化大肠杆菌后,也会被抗性、及大肠杆菌自身的复制机制筛选掉。如果你还是觉得闹心的话。使用PEG-4000(好像是4000)可以抑制环化现象。PEG的作用主要是促进连接反应中的线性连接以及多聚化产生。在Thermo系列的连接酶中都附带有PEG的。但你需要注意的是,可能会有多聚体连入你的载体,因为你300bp实在太小了。
    祝实验顺利
Let God do with it as He wills
2楼2014-03-06 13:47:20
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