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表达蛋白时离心收集的菌体重悬后会沉底！怎么回事？！！ 已有1人参与
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用BL21过表达内源蛋白，养菌的时候在0D600约0.8时加IPTG诱导,之后菌体几乎没长， 离心收菌体后重悬，准备超声破碎，结果发现重悬后的菌体静置后基本都沉下来了，上清很清亮，这是怎么回事？  我强行超声破碎后纯化蛋白，结果都没有目的蛋白，而之前其中有两个用相同的方法做的时候是有目的蛋白的，我怀疑是菌死了。。。求解~~~~！ |
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3楼2014-03-06 15:30:15
reallpf
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
蝶影拂袖: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢你的热心帮助~！ 2014-03-06 15:27:18
laozuzunzhe: 金币+4, 鼓励热心应助！ 2014-03-07 08:34:56
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这可能是诱导前，发酵环境的问题，营养、pH值都有可能，导致细胞严重结团，所以诱导不成功，没有目的蛋白。 个人愚见；仅供参考。 综合来看，这种情况首先就要先做镜检，排除结团、破碎、凋亡的可能性；其次就要测定发酵液上清的pH值；还可以把上清跑个液相看看各个成分的变化情况。同时也应该从最初的设计开始，筛查一遍，比如重组载体是否合理，片段是否正确接入等问题。 实验中出现问题是很正常的，几个基本的问题要首要排除，理论实践双层入手，应该能找到原因。另外，生物实验，大量重复很正常，要有耐心。 |
2楼2014-03-06 15:12:39
