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元一妄

金虫 (小有名气)

[求助] 关于蛋白质保存时间,-80℃保存6个月做双向电泳,影响有多大? 已有1人参与

如题所示,样品为瘤胃液,未经任何处理,取样后置于液氮中,之后转存于-80℃环境,如今已过半年时间,准备做双向电泳,不知会不会有不好的影响,都会有什么影响,谢谢大家了
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 元一妄 at 2014-02-22 17:43:57
提的时候准备提总蛋白,微生物很复杂,主要做差异分析,设计的是通过二维电泳找到差异蛋白后分析,都还没做了,怕坏了事,最坏的肯定是什么都没了,我是想问下最可能的结果,蛋白不完整了,或者怎么的...

二维电泳做蛋白组的前处理很重要,直接冻肯定不行,蛋白不可逆变型后,等电点和亚基结构都会改变,你提完蛋白最好用蛋白质组用溶解液重悬,超高速离心去碎片和细胞器。加入蛋白酶抑制剂,分装冻进-80大概能放一年。且最好除下盐,不然时间长了难除的,用丙酮沉淀也好,过柱子也好,超滤也好。反正我试过感觉丙酮效果最好,步骤越少损失越小。做IEF的时候最好预实验下调下电压。分的开一点。跑sdspage的时候注意起始电压。

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-09-12 09:47:23
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小小武

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
元一妄: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢了,这影响有多大啊? 2014-02-22 17:47:18
目标蛋白是什么?
不做任何处理,在-80度保存半年了,肯定是有影响了!
最坏的结果就是什么都分离不出来了。呵呵,要有心理准备。
爱拼才会赢!
2楼2014-02-21 16:17:25
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元一妄

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小武 at 2014-02-21 16:17:25
目标蛋白是什么?
不做任何处理,在-80度保存半年了,肯定是有影响了!
最坏的结果就是什么都分离不出来了。呵呵,要有心理准备。

提的时候准备提总蛋白,微生物很复杂,主要做差异分析,设计的是通过二维电泳找到差异蛋白后分析,都还没做了,怕坏了事,最坏的肯定是什么都没了,我是想问下最可能的结果,蛋白不完整了,或者怎么的
3楼2014-02-22 17:43:57
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果果isj

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 元一妄 at 2014-02-22 17:43:57
提的时候准备提总蛋白,微生物很复杂,主要做差异分析,设计的是通过二维电泳找到差异蛋白后分析,都还没做了,怕坏了事,最坏的肯定是什么都没了,我是想问下最可能的结果,蛋白不完整了,或者怎么的...

楼主之后有没有做二维啊,结果怎样?想请教一些二向电泳的问题,不要吝惜自己的经验和学识呐!
4楼2014-03-20 08:30:10
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