24小时热门版块排行榜    

查看: 2146  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

元一妄

金虫 (小有名气)

[求助] 关于蛋白质保存时间,-80℃保存6个月做双向电泳,影响有多大? 已有1人参与

如题所示,样品为瘤胃液,未经任何处理,取样后置于液氮中,之后转存于-80℃环境,如今已过半年时间,准备做双向电泳,不知会不会有不好的影响,都会有什么影响,谢谢大家了
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 元一妄 at 2014-02-22 17:43:57
提的时候准备提总蛋白,微生物很复杂,主要做差异分析,设计的是通过二维电泳找到差异蛋白后分析,都还没做了,怕坏了事,最坏的肯定是什么都没了,我是想问下最可能的结果,蛋白不完整了,或者怎么的...

二维电泳做蛋白组的前处理很重要,直接冻肯定不行,蛋白不可逆变型后,等电点和亚基结构都会改变,你提完蛋白最好用蛋白质组用溶解液重悬,超高速离心去碎片和细胞器。加入蛋白酶抑制剂,分装冻进-80大概能放一年。且最好除下盐,不然时间长了难除的,用丙酮沉淀也好,过柱子也好,超滤也好。反正我试过感觉丙酮效果最好,步骤越少损失越小。做IEF的时候最好预实验下调下电压。分的开一点。跑sdspage的时候注意起始电压。

[ 发自小木虫客户端 ]
6楼2014-09-12 09:47:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

小小武

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
元一妄: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢了,这影响有多大啊? 2014-02-22 17:47:18
目标蛋白是什么?
不做任何处理,在-80度保存半年了,肯定是有影响了!
最坏的结果就是什么都分离不出来了。呵呵,要有心理准备。
爱拼才会赢!
2楼2014-02-21 16:17:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

元一妄

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小武 at 2014-02-21 16:17:25
目标蛋白是什么?
不做任何处理,在-80度保存半年了,肯定是有影响了!
最坏的结果就是什么都分离不出来了。呵呵,要有心理准备。

提的时候准备提总蛋白,微生物很复杂,主要做差异分析,设计的是通过二维电泳找到差异蛋白后分析,都还没做了,怕坏了事,最坏的肯定是什么都没了,我是想问下最可能的结果,蛋白不完整了,或者怎么的
3楼2014-02-22 17:43:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

果果isj

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 元一妄 at 2014-02-22 17:43:57
提的时候准备提总蛋白,微生物很复杂,主要做差异分析,设计的是通过二维电泳找到差异蛋白后分析,都还没做了,怕坏了事,最坏的肯定是什么都没了,我是想问下最可能的结果,蛋白不完整了,或者怎么的...

楼主之后有没有做二维啊,结果怎样?想请教一些二向电泳的问题,不要吝惜自己的经验和学识呐!
4楼2014-03-20 08:30:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 收08调剂生 +3 komorebi69 2026-03-18 3/150 2026-03-24 12:03 by c陈哲
[考研] 293求调剂 +5 加一一九 2026-03-24 5/250 2026-03-24 11:54 by syl20081243
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分,一志愿四川大学,诚心求调剂 +12 吃吃吃才有意义 2026-03-19 13/650 2026-03-24 10:06 by NCUT_Yu
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +6 holy J 2026-03-21 6/300 2026-03-24 09:51 by hengsmith
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123!
[考研] 307求调剂 +11 冷笙123 2026-03-17 11/550 2026-03-22 20:16 by edmund7
[考研] 287求调剂 +8 晨昏线与星海 2026-03-19 9/450 2026-03-22 17:01 by i_cooler
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 材料学硕301分求调剂 +7 Liyouyumairs 2026-03-21 7/350 2026-03-21 22:31 by peike
[考研] 0805 316求调剂 +3 大雪深藏 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:55 by 学员8dgXkO
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 @taotao 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:35 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
信息提示
请填处理意见