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元一妄

金虫 (小有名气)

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[求助] 关于蛋白质保存时间，-80℃保存6个月做双向电泳，影响有多大？已有1人参与

如题所示，样品为瘤胃液，未经任何处理，取样后置于液氮中，之后转存于-80℃环境，如今已过半年时间，准备做双向电泳，不知会不会有不好的影响，都会有什么影响，谢谢大家了

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妄

1楼2014-02-21 14:16:50

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snoopytbw

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引用回帖:

3楼: Originally posted by 元一妄 at 2014-02-22 17:43:57
提的时候准备提总蛋白，微生物很复杂，主要做差异分析，设计的是通过二维电泳找到差异蛋白后分析，都还没做了，怕坏了事，最坏的肯定是什么都没了，我是想问下最可能的结果，蛋白不完整了，或者怎么的...

二维电泳做蛋白组的前处理很重要，直接冻肯定不行，蛋白不可逆变型后，等电点和亚基结构都会改变，你提完蛋白最好用蛋白质组用溶解液重悬，超高速离心去碎片和细胞器。加入蛋白酶抑制剂，分装冻进-80大概能放一年。且最好除下盐，不然时间长了难除的，用丙酮沉淀也好，过柱子也好，超滤也好。反正我试过感觉丙酮效果最好，步骤越少损失越小。做IEF的时候最好预实验下调下电压。分的开一点。跑sdspage的时候注意起始电压。

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