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黑猩猩

新虫 (初入文坛)

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[求助] 将一个基因的几段外显子拼在一起已有8人参与

我通过PCR产物直接测序将一个基因的三段外显子测出来了，但是如何将这三段外显子拼起来，求指教！

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1楼 2014-02-20 11:12:30

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西瓜

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+5, 老版主热心！ 2014-02-22 12:49:23

Overlap PCR如果产物很长的话不容易做。做的话建议两两融合，同时融合三个片段会难很多。
个人更倾向于3楼的说法。提RNA，再反转录得到没有内含子的cDNA，然后用cDNA为模板直接扩增三个外显子。

如果技术成熟，都顺利的话，用cDNA扩增比Overlap PCR要快很多。当然，前者的试剂成本也高一点，但是得到的cDNA可以长期保存，也可以扩其他东西。不过我认为前者技术难度小一些，后者中间卡住的几率还是蛮高的。时间也是成本。

两者都是可行的，楼主结合自己对两种技术的掌握程度，还有实验室的情况选吧。