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AFM木虫 (正式写手)
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[交流]
求助 噬菌体培养不出来，怎么办？谢谢 已有1人参与
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各位战友，最近作一些噬菌体方面的实验，按照《分子克隆》里的实验方法进行操作，可是没有噬斑出现（液体也没变澄清），请战友看看是不是哪一步有问题，具体试验步骤如下： 一 固体培养基法（测噬菌体的浓度） 取100μL的耻垢分支杆菌（109cfu/mL）与100μL不同稀释度的噬菌体混匀，于37℃温育15-20min，然后加入3mL 50℃的软琼脂培养基，混匀后倒上层平板，37℃培养，三天后没有噬菌斑出现。 二液体培养法 取100μL的耻垢（109cfu/mL）与100μL不同稀释度的噬菌体混匀，于37℃温育15-20min，然后加入10mL的液体培养基，37℃振摇培养，两天后液体也没有变澄清。 三 提取噬菌体DNA 按照《分子克隆》的方法进行操作，其中有一步是1010宿主菌与噬菌体（107-108）混匀后，加入500mL新鲜培养基，剧烈振摇（条件所限，我采用200rpm），8-12h后可观察到液体变澄清，可是培养15h后液体依然浑浊，而且加入氯仿后也没有变澄清？ 到底是哪里出现问题了，另外问一下耻垢分支杆菌生长至对数期和稳定期各需要多长时间啊！谢谢各位了！ |
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weng1988
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2楼2011-03-24 21:14:44