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yipan 
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感谢参与，应助指数 +1
飘凝alice: 金币+5 2014-02-20 14:24:36
感谢参与，应助指数 +1
飘凝alice: 金币+5 2014-02-20 14:24:36
| 人皮肤成纤维细胞经分离得到后，在体外容易培养，培养基为DMEM(Dulbecco MEM)+10%NBS(小牛血清)或者RPMI-1640+10%NBS(小牛血清)，培养方法主要有两种：静态培养和动态培养[10]。静态培养，即在培养时培养液静止不动，这种方法操作简单，不易染菌。但由于营养液不动，细胞从营养液中摄取营养或向外排出代谢产物都不很充分，细胞气体交换要通过培养液厚层，这些不利于细胞的生长。而动态培养是一种悬浮培养状态，细胞混合均匀，营养利用充分，利于细胞的生长。以往人们常用方瓶静态培养人皮肤成纤维细胞，但人皮肤成纤维细胞是一种贴壁细胞，在方瓶中培养时受到表面积限制，获得的细胞产量低，一般不能满足组织工程皮肤的大量需要。当细胞生长融合率达90﹪以上时，倒掉瓶内旧培养液，用PBS（pH 7.2～7.4）洗三次，加入1ml的0.25﹪胰蛋白酶溶液，消化1～3min后把培养瓶放置在倒置显微镜下进行观察，发现细胞回缩、细胞间隙增大后，加含10﹪NBS的RPMI-1640或DMEM培养液终止消化。用弯头吸管轻轻吹打，使细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液，计数，以 1:3的比例接种至 100ml培养瓶中[11]，待细胞生长融合率达90﹪以上，进行下一次传代。 |
2楼2014-02-19 13:35:17
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飘凝alice
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