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新虫 (初入文坛)

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Cas9技术的脱靶引起了关注

　　　在2014年《Nature methods》首刊中，作为最新的基因组编辑技术，TALEN和CRISPR/Cas9技术都被列为2014年值得关注的技术。文中指出，一方面TALEN不仅用于普通的基因修饰，还可将成熟的TALE用于修饰表观基因组，另一方面也明确指出，CRISPR/Cas9脱靶现象一直是科学家们关注但无法从根本上消除的缺陷，这一缺陷的存在使得CRISPR/Cas9在临床应用和科学研究中都受到很大局限。
　　　TALEN作为成熟的基因修饰技术通过长度为40bp左右的识别序列定位目标基因，在特异位点修饰靶基因，已有文章证实TALEN不存在脱靶现象，现已成功应用于基因敲除、基因敲入、定点突变、microRNA和lncRNA敲除，同时利用TALE蛋白的定位把TALE连接上其他因子，如转录激活、抑制、甲基化酶等，用于其他方面的研究。CRISPR/Cas9作为基因编辑工具和TALEN一样具有打靶目的基因的功能，但CRISPR/Cas9本身固有的脱靶效应让研究者们对此一直束手无策，其脱靶效应的存在主要是因为与靶基因结合的序列长度仅20bp，且配对的20bp中只有靠近PAM处10-12bp碱基是核心序列，剩下的8-10bp碱基的错配对靶位点的识别影响较小，而要想在一个基因组中产生特异性位点至少需要16个碱基的配对才可实现特异，所以CRISPR/Cas9脱靶的存在是显而易见的。除此之外，CRISPR/Cas9对靶基因的识别是通过RNA与DNA的结合，二者结合的牢固性及识别的核心序列长度较短，容易造成脱靶。
　　　过去一段时间有些研究者认为CRISPR/Cas9的向导RNA设计和构建比较简单，TALEN质粒构建步骤繁琐，所以尽管他们知道CRISPR/Cas9的脱靶严重，但仍选择容易操作的CRISPR/Cas9，而现在FastTALE技术的出现使得TALEN质粒的构建可以很容易地在1天内完成，从而更能方便研究人员对TALEN技术的应用。

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