| 查看: 1110 | 回复: 6 | |||
[求助]
探针设计 已有2人参与
|
|
问问做qPCR时，探针怎么设计？在设计时有什么要求？ 在合成时，那几个荧光基团好用？ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有53人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
yipan 
铜虫 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 214 (大学生)
- 金币: 17320.4
- 散金: 275
- 红花: 6
- 帖子: 4314
- 在线: 195.9小时
- 虫号: 2743878
- 注册: 2013-10-22
- 性别: GG
- 专业: 整合生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-18 11:47:02
爱上鱼……: 金币+3, ★有帮助, 多谢，探针设计有专门的软件没有，有没有推荐下的？ 2014-02-20 15:09:53
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-18 11:47:02
爱上鱼……: 金币+3, ★有帮助, 多谢，探针设计有专门的软件没有，有没有推荐下的？ 2014-02-20 15:09:53
|
Taqman@探针是最早用于定量的方法。就在PCR扩增时加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针 为一寡核苷酸：5’端标记一个报告荧光基团，3’端标记一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，也就是FRET反 应；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分 析基因突变（SNP），有望成为基因诊断和个体化用药分析的首选技术平台。 一般real-time PCR引物的设计遵循下面一些原则： 扩增产物长度在80-150bp。 引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。 产物不能形成二级结构。 产物长度一般在15-30碱基之间。 G+C含量在40%-60%之间。 碱基要随机分布。 引物自身不能有连续4个碱基的互补。 引物之间不能有连续4个碱基的互补。 引物5’端可以修饰。 引物3’端不可修饰。 引物3’端要避开密码子的第3位。 Taqman@探针的设计稍有不同，一般有公司设计合成。遵循下面以下原则： 尽量靠在上游引物； 长度30-45bp，Tm比引物高至少5℃； 5’端不要是G，G会有淬灭作用，影响定量 |
2楼2014-02-18 10:09:30
yipan
铜虫 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 214 (大学生)
- 金币: 17320.4
- 散金: 275
- 红花: 6
- 帖子: 4314
- 在线: 195.9小时
- 虫号: 2743878
- 注册: 2013-10-22
- 性别: GG
- 专业: 整合生物学
3楼2014-02-18 10:11:14
jiaolong11a
新虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 46 (小学生)
- 金币: 487.3
- 红花: 5
- 沙发: 1
- 帖子: 227
- 在线: 29.5小时
- 虫号: 1244690
- 注册: 2011-03-25
- 性别: MM
- 专业: 基因表达调控与表观遗传学
4楼2014-02-18 10:40:26
5楼2014-02-20 15:12:21
yipan
铜虫 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 214 (大学生)
- 金币: 17320.4
- 散金: 275
- 红花: 6
- 帖子: 4314
- 在线: 195.9小时
- 虫号: 2743878
- 注册: 2013-10-22
- 性别: GG
- 专业: 整合生物学
6楼2014-02-20 15:19:49
yipan
铜虫 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 214 (大学生)
- 金币: 17320.4
- 散金: 275
- 红花: 6
- 帖子: 4314
- 在线: 195.9小时
- 虫号: 2743878
- 注册: 2013-10-22
- 性别: GG
- 专业: 整合生物学
7楼2014-02-20 15:21:56
20