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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 破碎米曲霉得胞内酶
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善其身

新虫 (初入文坛)

[求助] 破碎米曲霉得胞内酶 已有2人参与

实验筛选到了一株降解特异底物的米曲霉，并且通过实验已经证明了产生催化作用的酶为胞内酶。想继续往酶的水平上进行研究，用超声破碎仪进行破碎，但破碎后却没有测到酶活，变幅杆、功率、冰浴等，应该考虑的问题都考虑了，反复实验多次也是相同结果。看了小木虫上的其他帖子，找不到原因所在，瓶颈啊！超声破碎的方法对于米曲霉到底可不可行？若可行，问题何在？若此不可行，那用什么方法可行？把全部金币都拿出来了，求大神指点！众人拾柴火焰高，大家多交流交流。
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1楼 2014-02-17 15:47:33
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善其身

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 飘雪3889 at 2014-02-26 16:33:01
你测酶活的条件是不是成熟的？看你的描述，似乎是前期的实验证实整体细胞有催化能力，想往酶上面更进一步。我之前怎么都测不出来，后来发现是测酶活条件不大对。...

简单的说，就是把酶液和底物溶液混合，30℃恒温震荡，测底物残留量，会不会是我用的缓冲液有问题？能不能加一下你的QQ，请教请教
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8楼2014-02-26 20:28:23
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bigboy2050

铜虫 (小有名气)
工业上用高压均质机，你可以加点溶菌酶再超声，或者反复冻融。
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职业无分贵贱，做事要有格调
2楼2014-02-17 16:41:46
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善其身

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bigboy2050 at 2014-02-17 16:41:46
工业上用高压均质机，你可以加点溶菌酶再超声，或者反复冻融。

很多文章单用超声就可以了，你的意思是我没能实现破碎的目的？（还有个小问题，液体培养后形成了菌丝球，但后面超声破碎要重悬，怎样处理简便可行）
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3楼2014-02-18 15:18:23
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bigboy2050

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 善其身 at 2014-02-18 15:18:23
很多文章单用超声就可以了，你的意思是我没能实现破碎的目的？（还有个小问题，液体培养后形成了菌丝球，但后面超声破碎要重悬，怎样处理简便可行）...

建议先用高压均质机试一下，联系设备厂家一般乐意让试（一般至少1L料液），至于超声不能检测到酶活的原因再慢慢分析，这样可能可以节省你的时间。
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职业无分贵贱，做事要有格调
4楼2014-02-20 08:54:14
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