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善其身

新虫 (初入文坛)

[求助] 破碎米曲霉得胞内酶 已有2人参与

实验筛选到了一株降解特异底物的米曲霉,并且通过实验已经证明了产生催化作用的酶为胞内酶。想继续往酶的水平上进行研究,用超声破碎仪进行破碎,但破碎后却没有测到酶活,变幅杆、功率、冰浴等,应该考虑的问题都考虑了,反复实验多次也是相同结果。看了小木虫上的其他帖子,找不到原因所在,瓶颈啊!超声破碎的方法对于米曲霉到底可不可行?若可行,问题何在?若此不可行,那用什么方法可行?把全部金币都拿出来了,求大神指点!众人拾柴火焰高,大家多交流交流。
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bigboy2050

铜虫 (小有名气)

工业上用高压均质机,你可以加点溶菌酶再超声,或者反复冻融。
职业无分贵贱,做事要有格调
2楼2014-02-17 16:41:46
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善其身

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bigboy2050 at 2014-02-17 16:41:46
工业上用高压均质机,你可以加点溶菌酶再超声,或者反复冻融。

很多文章单用超声就可以了,你的意思是我没能实现破碎的目的?(还有个小问题,液体培养后形成了菌丝球,但后面超声破碎要重悬,怎样处理简便可行)
3楼2014-02-18 15:18:23
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bigboy2050

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 善其身 at 2014-02-18 15:18:23
很多文章单用超声就可以了,你的意思是我没能实现破碎的目的?(还有个小问题,液体培养后形成了菌丝球,但后面超声破碎要重悬,怎样处理简便可行)...

建议先用高压均质机试一下,联系设备厂家一般乐意让试(一般至少1L料液),至于超声不能检测到酶活的原因再慢慢分析,这样可能可以节省你的时间。
职业无分贵贱,做事要有格调
4楼2014-02-20 08:54:14
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飘雪3889

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 善其身 at 2014-02-18 15:18:23
很多文章单用超声就可以了,你的意思是我没能实现破碎的目的?(还有个小问题,液体培养后形成了菌丝球,但后面超声破碎要重悬,怎样处理简便可行)...

我是用涡旋重悬或者磁力搅拌器搅拌重悬的
5楼2014-02-24 12:44:11
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善其身

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 飘雪3889 at 2014-02-24 12:44:11
我是用涡旋重悬或者磁力搅拌器搅拌重悬的...

嗯,谢谢,这个我也是这样做的,但就是超声破碎过后始终检测不到酶活,能否指点一二啊?!
6楼2014-02-26 10:06:39
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飘雪3889

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 善其身 at 2014-02-26 10:06:39
嗯,谢谢,这个我也是这样做的,但就是超声破碎过后始终检测不到酶活,能否指点一二啊?!...

你测酶活的条件是不是成熟的?看你的描述,似乎是前期的实验证实整体细胞有催化能力,想往酶上面更进一步。我之前怎么都测不出来,后来发现是测酶活条件不大对。
7楼2014-02-26 16:33:01
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善其身

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 飘雪3889 at 2014-02-26 16:33:01
你测酶活的条件是不是成熟的?看你的描述,似乎是前期的实验证实整体细胞有催化能力,想往酶上面更进一步。我之前怎么都测不出来,后来发现是测酶活条件不大对。...

简单的说,就是把酶液和底物溶液混合,30℃恒温震荡,测底物残留量,会不会是我用的缓冲液有问题?能不能加一下你的QQ,请教请教
8楼2014-02-26 20:28:23
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飘雪3889

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 善其身 at 2014-02-26 20:28:23
简单的说,就是把酶液和底物溶液混合,30℃恒温震荡,测底物残留量,会不会是我用的缓冲液有问题?能不能加一下你的QQ,请教请教...

你看看缓冲液的ph、反应时间有木有问题。QQ就不用了,我也是刚上路的菜鸟,嘿嘿
9楼2014-02-27 14:26:41
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蓝心草

铜虫 (小有名气)

请问你这个米曲霉超声做好了么?我过两天也要做,请指教一下
为美好努力
10楼2014-03-03 10:19:09
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