| 查看: 3238 | 回复: 15 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
一休陈金虫 (正式写手)
|
[求助]
关于二倍体酿酒酵母基因敲除的疑问 已有2人参与
|
||
|
各位虫友大家新年好。 我最近开始做二倍体酿酒酵母基因的敲除工作，现在遇到两个疑问：其一，构建一个（上游同源臂+G418抗性基因+下游同源臂）的敲除盒，一次转化，有没有可能将两个等位基因同时敲除？这样的话，我用菌落PCR验证，P不出来目的基因条带的且带有G418抗性的菌落岂不就是敲除的阳性菌落？ 其二，如果第一点不成立，即是一个敲除盒经过一次转化只能敲除一个等位基因的话，第二个基因我怎么敲除呢？还望有二倍体酿酒酵母敲除经验的虫友们多多指教！再次祝福大家新年快乐，马年龙马精神，百尺竿头，更进一步！谢谢。 |
回复此楼» 猜你喜欢
A期刊撤稿
已经有3人回复
-
职称评审没过，求安慰
已经有34人回复
-
垃圾破二本职称评审标准
已经有17人回复
-
回收溶剂求助
已经有6人回复
-
投稿Elsevier的Neoplasia杂志，到最后选publishing options时页面空白，不能完成投稿
已经有22人回复
-
申请26博士
已经有5人回复
-
EST投稿状态问题
已经有7人回复
-
毕业后当辅导员了，天天各种学生超烦
已经有4人回复
-
求助文献
已经有3人回复
-
投稿返修后收到这样的回复，还有希望吗
已经有8人回复
beer胖
新虫 (小有名气)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 1496.2
- 帖子: 146
- 在线: 83.2小时
- 虫号: 1305517
- 注册: 2011-05-25
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
一休陈: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢。还希望以后能够得到您的指教。非常感谢。祝福虫友马年快乐。 2014-02-17 11:02:39
一休陈: 金币+10, ★★★很有帮助, 谢谢。还希望以后能够得到您的指教。非常感谢。祝福虫友马年快乐。 2014-02-17 11:02:39
|
如果二倍体酵母HO基因没有活性的话，就直接先分单倍体，再做基因敲除，而且还可以不用抗性基因，直接用尿嘧啶缺陷型就行；然后再用HO基因恢复为二倍体或两种配型的工程菌交配获得二倍体，单倍体很好分离的，直接生孢后蜗牛酶破壁，涂板筛选就行了。 直接以二倍体进行基因敲除的话，也有可能会产生两个等位基因的敲除，只是概率极低，难度很大。很幸运的是我再敲除二倍体HO基因的时候获得了两个等位基因HO基因均被敲除的突变体。 |
11楼2014-02-17 10:01:22
2楼2014-02-12 16:31:17
yuanbo934
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 24849.5
- 红花: 4
- 帖子: 2891
- 在线: 229.8小时
- 虫号: 462771
- 注册: 2007-11-19
- 性别: GG
- 专业: 微生物资源与分类学
3楼2014-02-13 15:21:40
一休陈
金虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1248.4
- 散金: 35
- 红花: 1
- 帖子: 525
- 在线: 79.1小时
- 虫号: 970791
- 注册: 2010-03-14
- 性别: GG
- 专业: 微生物药物
4楼2014-02-13 15:23:46