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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 化学分析 » 标准曲线方法求鉴定
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pony3598

木虫 (正式写手)

[交流] 标准曲线方法求鉴定

本人药物化学专业，不常使用标准曲线。现有一样品，本人通过其他方法得到其中的目标产物，并测定样品中目标物质含量在5%左右，而提供样品者坚信其中必定还有40%以上的样品，其理由是在247nm下HPLC图中峰面积为40%，虽然我知道他这样的推测不严谨，但是为了更具说服力，现在准备做一个标准曲线。打算采用如下实验方法：
波长247nm，进样量10μl

取标准品25mg用色谱甲醇定容直5ml，取部分作为5mg/ml的标准品溶液1。
取标准品1溶液2.5ml定容至5ml，取部分作为2.5mg/ml的标准品溶液2。
取标准品2溶液2.5ml定容至5ml，取部分作为1.25mg/ml的标准品溶液3。
取标准品3溶液2.5ml定容至5ml，取部分作为0.625mg/ml的标准品溶液4。
取标准品4溶液2.5ml定容至5ml，取部分作为0.3125mg/ml的标准品溶液5。
取标准品5溶液2.5ml定容至5ml，取部分作为0.15625mg/ml的标准品溶液6。
取标准品6溶液2.5ml定容至5ml，取部分作为0.078125mg/ml的标准品溶液7。
取标准品7溶液2.5ml定容至5ml，取部分作为0.039125mg/ml的标准品溶液8。

通过对标准溶液1至8的液相响应值与浓度间的关系，建立标准曲线。

取样品25mg，定容至5ml，测定响应值，再通过标准曲线求样品量。

以上实验步骤是否存在问题，请不吝赐教！谢谢！
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1楼 2014-02-08 19:19:26
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yeer

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
浓度是否高了点？5mg/ml？至于吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-02-08 19:55:22
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rfq123

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
pony3598: 金币+1 2014-02-08 22:10:10
方法倒是可以，但没必要搞那么复杂，你配个5%的标样和样品一起同条件进行HPLC分析，进行峰面积对比即可。
还有你说的提供样品者坚信其中必定还有40%以上的样品，其理由是在247nm下HPLC图中峰面积为40%，他的理由是不对的，峰面积的比值和样品中各组分对检测器的灵敏度有关。
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3楼2014-02-08 21:41:26
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pony3598

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by rfq123 at 2014-02-08 21:41:26
方法倒是可以，但没必要搞那么复杂，你配个5%的标样和样品一起同条件进行HPLC分析，进行峰面积对比即可。
还有你说的提供样品者坚信其中必定还有40%以上的样品，其理由是在247nm下HPLC图中峰面积为40%，他的理由是 ...

嗯，你这样的方法也很不错，谢谢！
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4楼2014-02-08 22:10:07
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天天2016

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
pony3598: 金币+1 2014-02-14 12:40:44
其理由是在247nm下HPLC图中峰面积为40%
不同物质在247nm下峰面积占到40%，含量就40%了啊？！相同的色谱条件，多换几个波长来做，这个物质的峰面积有可能大于40%，也有可能小于40%，你再问问提供样品者如何解释呢? 不同物质灵敏度不同的！！！
楼主工作曲线这么做太辛苦了，如果不太专业的话是可以的，专业一点你做出来的不一定可用了。你的LC没有自动进样器嘛？配制一个浓度，不同进样体积就可以了啊
希望对你有帮助哈
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5楼2014-02-09 18:10:17
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zgd1303

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 天天2016 at 2014-02-09 18:10:17
其理由是在247nm下HPLC图中峰面积为40%
不同物质在247nm下峰面积占到40%，含量就40%了啊？！相同的色谱条件，多换几个波长来做，这个物质的峰面积有可能大于40%，也有可能小于40%，你再问问提供样品者如何解释呢?  ...

你好，你说的“配制一个浓度，不同进样体积就可以了啊”，但是它的浓度还是不变的呀，只是体积增加而已，峰面积不是浓度的一个响应吗？
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6楼2014-12-15 16:16:56
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