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我是传奇456

金虫 (正式写手)

[求助] 国外邮寄回来的突变型拟南芥的种子长不出来,求助!已有2人参与

用MS固体培养基培育(灭菌前调ph至5.8),种子消毒后加入培养基中,封口,4℃春化3天,然后培养条件为温度 23℃/18℃,光/暗周期 16/8h。
结果同样条件下的野生型拟南芥发芽率约80%,而此突变型拟南芥发芽率为0。
难道是国外邮寄的过程中有什么措施使得拟南芥种子失活了?
特来求助!
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
会不会是种子是陈年种子。发芽率低。
hehe
2楼2014-02-09 09:20:52
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chiden

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
我是传奇456: 金币+10, ★★★很有帮助, THX~~~ 2014-02-09 15:21:33
amisking: MolEPI+1, 鼓励发帖交流! 2014-02-09 18:09:54
首先, 如果是陈年的种子确实有很大可能发芽率本身就很低,你用野生型发芽率做对照,那么这个是同一时间收获的种子么。
其次就是你这个突变型拟南芥是否本身对出芽就有影响?你也没有具体提到这个。
第三,消毒是怎样消毒的?拟南芥的种子消毒有很多种方式,不同时间收获的种子,或者-20°保存过的种子在发芽的时候我们会采用不一样的消毒方式,这个跟个人的经验也有一定的关系,但是无论哪种一般而言差别并不的很大。
第四,4°春化的时间你可以再缩短一点,两天也可以,这个仅供参考你试试
第五,将培养间改为1/2 MS培养间呢,注意在萌发的过程中不要使得培养间水汽过重,尽量保持无明显水滴,不要太湿也是有影响的
以上是我播种拟南芥时的一些经验,希望对你有帮助吧
即使难过,也要微笑着走下去
3楼2014-02-09 14:06:12
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chiden

木虫 (正式写手)

那个第五中出现的培养间是打错字了,我想说的其实是培养基哈,打快了结果成了培养间了
即使难过,也要微笑着走下去
4楼2014-02-09 14:08:30
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我是传奇456

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chiden at 2014-02-09 14:06:12
首先, 如果是陈年的种子确实有很大可能发芽率本身就很低,你用野生型发芽率做对照,那么这个是同一时间收获的种子么。
其次就是你这个突变型拟南芥是否本身对出芽就有影响?你也没有具体提到这个。
第三,消毒是 ...

A:
一、这个时间确实不知道
二、这个突变应该不会影响,别人已经发了文章的。
三、消毒方式是1%次氯酸,90%乙醇,洗5min,然后dd水洗5次播种的。
Q:
一、春化是否可以先春化再播种到培养基直接放进人工气候箱?
二丶是否可以将种子直接撒播到土里,这样会不会发芽率更高?
三、还有什么消毒方式呢?
种子可能所余不多了,所以想慎重点。。
感谢回答!
5楼2014-02-09 15:42:51
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chiden

木虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-10 16:52:14
引用回帖:
5楼: Originally posted by 我是传奇456 at 2014-02-09 15:42:51
A:
一、这个时间确实不知道
二、这个突变应该不会影响,别人已经发了文章的。
三、消毒方式是1%次氯酸,90%乙醇,洗5min,然后dd水洗5次播种的。
Q:
一、春化是否可以先春化再播种到培养基直接放进人工气候箱 ...

建议:
1. 培养基播种:消毒方式改为75%酒精洗涤8min,在洗涤过程中置于37°摇床,转速约180rpm,取出后dd水洗3次~5次(超净工作台内操作)。将种子用枪头(灭菌消毒的剪掉部分尖端的枪头)点在培养基上,务必将种子带进去的水在超净工作台内吹干后封口。之后4°春化处理。
2. 一般不建议先春化再播种,春化后的种子在消毒的过程更容易失活。
3. 土壤播种可以尝试,但并不一定就说发芽率会更高。取约20-30颗足以。土壤要求不能过于干燥,但也不能水过量,自己看着办;加入的蛭石最好用小块是蛭石。像有的实验室中玉米用的蛭石,对于拟南芥而言就有些过了。
即使难过,也要微笑着走下去
6楼2014-02-09 15:58:20
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