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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关双底物催化反应的Km值的问题
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once1015

木虫 (正式写手)

[求助] 有关双底物催化反应的Km值的问题 已有3人参与

本人对生化了解比较少，特请教一个问题：

我的催化反应如下：  1;A+NADPH-----(酶催化)--------B+NADP+
                                 2; A+NADH-----(酶催化)--------B+NAD+

也就是我的酶可以利用 NADPH 或者NADH 做辅酶。

可是我在计算 关于底物A的Km值的时候 （两次分别是 用不同的辅酶过量）两次的结果有一定偏差（大概差5%）。 可是生化书上面写的是 Km说明了底物与酶的结合能力啊，应该是常数，与辅酶没有关系啊。

请问，我的实验偏差是可以存在的？ 还是两个Km值一定相同？
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1楼 2014-01-28 17:26:29
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我是小木虫

银虫 (小有名气)
请问双底物求Km用什么拟合曲线呀？双底物求各自酶活，是固定一个底物过量，变化另一个底物的量吗？有木有这方面的参考书呀？谢谢你
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5楼2014-02-14 10:13:39
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-02-03 02:56:28
5%的试验误差，应该是很好的结果了吧，在可以接受的范围内，可以认为Km值相同
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-02-03 01:03:28
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天空下的傻瓜

铁杆木虫 (知名作家)

来自猩猩的我

【答案】应助回帖

Km相同，至于你的偏差不知道了就，理论上偏差不会那么大
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众人皆醉，惟我独醒，就此沉沦，人称睡神。
3楼2014-02-05 11:43:14
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hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-14 13:23:44
gyesang: 回帖置顶 2014-03-30 00:24:28
1.Km值反映底物与酶的结合，但其本质是1/2Vmax的浓度。不同辅酶可能影响反应速度，也可能影响底物的结合。在这个反应中实际辅酶也是一种底物，不过其Km远低于工作浓度，在反应过程中浓度变化对反应速度影响很小。
2.由于NADPH和NADH的结构比较类似，二者对有些酶的影响相差不大。有5%的差异是正常的。酶的参数测定一般都是要标注具体测定方法的，使用不同方法得到的Km有差异是很正常的。
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4楼2014-02-08 08:22:26
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