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木虫 (正式写手)

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[求助] 有关双底物催化反应的Km值的问题已有3人参与

本人对生化了解比较少，特请教一个问题：

我的催化反应如下： 1;A+NADPH-----(酶催化)--------B+NADP+
2; A+NADH-----(酶催化)--------B+NAD+

也就是我的酶可以利用 NADPH 或者NADH 做辅酶。

可是我在计算关于底物A的Km值的时候（两次分别是用不同的辅酶过量）两次的结果有一定偏差（大概差5%）。可是生化书上面写的是 Km说明了底物与酶的结合能力啊，应该是常数，与辅酶没有关系啊。

请问，我的实验偏差是可以存在的？还是两个Km值一定相同？

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1楼 2014-01-28 17:26:29

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hl16010921

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-14 13:23:44
gyesang: 回帖置顶 2014-03-30 00:24:28

1.Km值反映底物与酶的结合，但其本质是1/2Vmax的浓度。不同辅酶可能影响反应速度，也可能影响底物的结合。在这个反应中实际辅酶也是一种底物，不过其Km远低于工作浓度，在反应过程中浓度变化对反应速度影响很小。
2.由于NADPH和NADH的结构比较类似，二者对有些酶的影响相差不大。有5%的差异是正常的。酶的参数测定一般都是要标注具体测定方法的，使用不同方法得到的Km有差异是很正常的。