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ERIC20081938

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 木霉转化求高手指点 已有4人参与

如题,最近一直在做木霉的PEG介导原生质体转化,用的筛选抗性是潮霉素,可是做了很多次,板上都很干净,一个都没长,下面将我的转化步骤大致说一下,求高手指点:
1 活化孢子,在摇瓶中30℃,170rpm培养约14h,让孢子萌发到一定长度。
2 制备原生质体,酶解,用的是lysingzyme (sigma)约2h,最终得到浓度约为1*108/mL的原生质体。
3 PEG介导转化,质粒浓度大于10ug,用的是25%的PEG6000。
4 上层琼脂涂布筛选平板。

可能这样说的也不是很清楚,跪求有经验的高手指点,感激不尽····
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Flytothesky```
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白茉莉

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

能否确认你的抗 性基因在木霉中能正常表达了
8楼2014-02-19 17:09:55
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orangeleaf

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2014-01-24 19:20:33
觉得问题在第三步,条件或操作的原因。
3 PEG介导转化,质粒浓度大于10ug,用的是25%的PEG6000。
工业酶-T180;AU-400FLD;B85vanguard;E3-1280v3;NH-D9L;8GBx2;R7-250A-ZLH4;Black500GB;EA191M;SK-8115;M111s
2楼2014-01-23 16:05:21
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ERIC20081938

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by orangeleaf at 2014-01-23 16:05:21
觉得问题在第三步,条件或操作的原因。
3 PEG介导转化,质粒浓度大于10ug,用的是25%的PEG6000。

请问,能不能具体说明一下呢?我可以加你QQ号吗?
Flytothesky```
3楼2014-01-24 10:02:07
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书枫2010

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我敲除过T.reesei的基因
4楼2014-02-18 17:33:06
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