应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】急急急！如何区分共聚焦显微镜拍出的荧光是绿色荧光蛋白还是细胞自身荧光
111/2返回列表12下一页
查看: 4181  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhangying720

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助】急急急！如何区分共聚焦显微镜拍出的荧光是绿色荧光蛋白还是细胞自身荧光 已有3人参与

本人是有机化学专业，最近在用自己的化合物做细胞转染，如图（暗场+明场），用的是A549细胞，转染拍出的荧光集中在细胞周围，这是正常现象吗？还是是细胞的自身荧光，怎么区分呢？我做了lip2000，是整个细胞都有绿色荧光，为什么我的是这样的呢？如果说是自身荧光的话，为什么我的其他化合物什么荧光都看不到呢？在此向各位前辈求助，谢谢了！！!
【求助】急急急！如何区分共聚焦显微镜拍出的荧光是绿色荧光蛋白还是细胞自身荧光[/img]
【求助】急急急！如何区分共聚焦显微镜拍出的荧光是绿色荧光蛋白还是细胞自身荧光-1[/img]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-01-20 18:12:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

percoll

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhangying720: 金币+2, ★有帮助 2014-01-25 15:17:25
应该不是细胞自身荧光，细胞自身荧光应该很弱，而且分布很弥散，你的图片中荧光在细胞内的分布并不是很均匀，而且比较亮，所以应该不是自身荧光。
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-20 19:12:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangying720

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by percoll at 2014-01-20 19:12:36
应该不是细胞自身荧光，细胞自身荧光应该很弱，而且分布很弥散，你的图片中荧光在细胞内的分布并不是很均匀，而且比较亮，所以应该不是自身荧光。

谢谢亲的回答，亲觉得是表达出来的绿色荧光蛋白是吗？为什么会这样分布呢？商品化的lip2000看着像是整个细胞都有很强的荧光
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-20 20:37:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
证明你的蛋白在包浆中弥散分布
没有特异性
赞一下 回复此楼
4楼2014-01-21 10:29:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangying720

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yang0071 at 2014-01-21 10:29:28
证明你的蛋白在包浆中弥散分布
没有特异性

没有特异性？不太明白，楼上能具体解释一下吗？拜托了，谢谢！
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-21 10:57:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

percoll

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主是只转的GFP吗？我只知道lipo2000对于难转的细胞，有时转染出来也是这样子，感觉荧光不是很均匀，所以我觉得你自己的试剂的转染效果应该不是很好。建议楼主最好用GFP抗体做western检测一下，这样就放心了。
赞一下 回复此楼
6楼2014-01-21 14:28:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangying720

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by percoll at 2014-01-21 14:28:15
楼主是只转的GFP吗？我只知道lipo2000对于难转的细胞，有时转染出来也是这样子，感觉荧光不是很均匀，所以我觉得你自己的试剂的转染效果应该不是很好。建议楼主最好用GFP抗体做western检测一下，这样就放心了。

嗯，我的试剂的转染效果是不太好，我是做有机合成的，只是最后做性质时看一下转染效果，目前就想确定一下它确实转染进去了，不是细胞自身荧光就行，我还用FITC-DNA拍过跨膜，能在细胞里看到亮点，但细胞核里很少。网上查的GFP抗体做western检测上好复杂啊，什么材料仪器步骤都没有，估计来不及做了。lipo2000对于难转的细胞也会出现这样的转染效果吗？
赞一下 回复此楼
7楼2014-01-21 14:55:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

percoll

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhangying720 at 2014-01-21 14:55:51
嗯，我的试剂的转染效果是不太好，我是做有机合成的，只是最后做性质时看一下转染效果，目前就想确定一下它确实转染进去了，不是细胞自身荧光就行，我还用FITC-DNA拍过跨膜，能在细胞里看到亮点，但细胞核里很少。 ...

应该是，而且荧光照片的效果跟你制爬片及封片的细节也有关系，western如果自己实验室做不了的话也可以外包给公司，估计也就两三百块钱。
赞一下 回复此楼
8楼2014-01-21 20:15:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangying720

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by percoll at 2014-01-21 20:15:10
应该是，而且荧光照片的效果跟你制爬片及封片的细节也有关系，western如果自己实验室做不了的话也可以外包给公司，估计也就两三百块钱。...

我的是直接在共聚焦培养皿里种细胞，加样拍照的，没有爬片封片。外包给公司的话，楼上有什么比较可靠的公司推荐吗？谢谢了
赞一下 回复此楼
9楼2014-01-22 10:40:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
LZ用没转GFP的细胞作空白对照，调显微镜，空白对照有自体荧光。所以激发状态下调到对照看不到，转染细胞有荧光就OK了。
赞一下 回复此楼
10楼2014-01-22 10:40:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhangying720 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +16 基诺咪客 2026-08-17 20/1000 2026-08-20 12:44 by 201120518022
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +16 Ldrop2023 2026-08-13 20/1000 2026-08-20 11:07 by xskun
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 21/1050 2026-08-20 10:37 by Vivilian
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +55 医学老男孩 2026-08-13 125/6250 2026-08-20 09:02 by 医学老男孩
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭