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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western主带附近有很细的条带
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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] western主带附近有很细的条带 已有3人参与

目的蛋白是第一张图，这次两张膜上都出现主带附近有一些比较细的条带，同样的样品和抗体前几天刚做过一轮，效果还挺好，只是上样量没太调好，所以这次重新做了。内参actin还正常，目的蛋白条带不好啊，求大神帮助！
western主带附近有很细的条带
BRM 1-16-1.jpg


western主带附近有很细的条带-1
ACTIN1 1-16.jpg
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1楼 2014-01-17 07:39:48
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wukaixz

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
weizhi111: 金币+5 2014-01-18 08:48:40
1.抗体是不是回收重复利用的？重复利用的抗体效价会降低。
2.样品是不是放的时间长了？蛋白有些降解，建议重新取样。若不是，可以用以前的样品做个阳性对照。看是否也是这样。
3.杂一抗前用5%的脱脂奶粉封闭30min,可以降低背景和杂带。
原因很多的，问一问你师兄师姐。

祝实验顺利！
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2楼2014-01-17 09:01:06
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daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
封闭的不彻底，导致杂条带很多。
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3楼2014-01-17 11:28:50
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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wukaixz at 2014-01-17 09:01:06
1.抗体是不是回收重复利用的？重复利用的抗体效价会降低。
2.样品是不是放的时间长了？蛋白有些降解，建议重新取样。若不是，可以用以前的样品做个阳性对照。看是否也是这样。
3.杂一抗前用5%的脱脂奶粉封闭30min ...

谢谢，抗体确实是回收用的（第二次），样品放的时间也不太长，前几天刚做过一轮，效果还不错。（希望不是降解，要不然重提就比较麻烦，还要重取样）。我确实是用5%脱脂奶封闭的，并且封闭了1.5小时，上次也是这么做的。
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4楼2014-01-17 14:23:35
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果抗体没有问题，且已经封闭了的话，那最有可能就是蛋白降解了。你再提一次试试，蛋白保存在什么条件下的也要追溯一下。
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5楼2014-01-17 15:10:23
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weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-01-17 15:10:23
如果抗体没有问题，且已经封闭了的话，那最有可能就是蛋白降解了。你再提一次试试，蛋白保存在什么条件下的也要追溯一下。

目的蛋白的那两张膜中，一张是几天前刚做过的样品，是变过性保存的，两一张膜上是新提的 蛋白
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6楼2014-01-17 22:07:53
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