应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western主带附近有很细的条带
61/1返回列表
查看: 813  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] western主带附近有很细的条带 已有3人参与

目的蛋白是第一张图，这次两张膜上都出现主带附近有一些比较细的条带，同样的样品和抗体前几天刚做过一轮，效果还挺好，只是上样量没太调好，所以这次重新做了。内参actin还正常，目的蛋白条带不好啊，求大神帮助！
western主带附近有很细的条带
BRM 1-16-1.jpg


western主带附近有很细的条带-1
ACTIN1 1-16.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-01-17 07:39:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wukaixz

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
weizhi111: 金币+5 2014-01-18 08:48:40
1.抗体是不是回收重复利用的？重复利用的抗体效价会降低。
2.样品是不是放的时间长了？蛋白有些降解，建议重新取样。若不是，可以用以前的样品做个阳性对照。看是否也是这样。
3.杂一抗前用5%的脱脂奶粉封闭30min,可以降低背景和杂带。
原因很多的，问一问你师兄师姐。

祝实验顺利！
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-17 09:01:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

daibingling

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
封闭的不彻底，导致杂条带很多。
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-17 11:28:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wukaixz at 2014-01-17 09:01:06
1.抗体是不是回收重复利用的？重复利用的抗体效价会降低。
2.样品是不是放的时间长了？蛋白有些降解，建议重新取样。若不是，可以用以前的样品做个阳性对照。看是否也是这样。
3.杂一抗前用5%的脱脂奶粉封闭30min ...

谢谢，抗体确实是回收用的（第二次），样品放的时间也不太长，前几天刚做过一轮，效果还不错。（希望不是降解，要不然重提就比较麻烦，还要重取样）。我确实是用5%脱脂奶封闭的，并且封闭了1.5小时，上次也是这么做的。
赞一下 回复此楼
4楼2014-01-17 14:23:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果抗体没有问题，且已经封闭了的话，那最有可能就是蛋白降解了。你再提一次试试，蛋白保存在什么条件下的也要追溯一下。
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-17 15:10:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-01-17 15:10:23
如果抗体没有问题，且已经封闭了的话，那最有可能就是蛋白降解了。你再提一次试试，蛋白保存在什么条件下的也要追溯一下。

目的蛋白的那两张膜中，一张是几天前刚做过的样品，是变过性保存的，两一张膜上是新提的 蛋白
赞一下 回复此楼
6楼2014-01-17 22:07:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weizhi111 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 诚招农业博士 +3 心欣向荣 2026-02-28 3/150 2026-03-02 13:33 by 时间不狗
[考研] 材料学硕318求调剂 +9 February_Feb 2026-03-01 9/450 2026-03-02 13:31 by njzyff
[考研] 0856调剂 +6 刘梦微 2026-02-28 6/300 2026-03-02 12:44 by 无际的草原
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +6 ieewxg 2026-02-25 7/350 2026-03-02 12:44 by stidwellNK
[考研] 292求调剂 +7 yhk_819 2026-02-28 7/350 2026-03-02 12:43 by 无际的草原
[考研] 085600 英一数二272求调剂 5+4 vida_a 2026-03-01 10/500 2026-03-02 12:33 by vida_a
[考研] 材料学硕318求调剂 +14 February_Feb 2026-03-01 16/800 2026-03-02 11:17 by yuchj
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +6 wsl111 2026-03-01 6/300 2026-03-02 11:00 by ydudjddnd
[考研] 材料调剂 +6 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 7/350 2026-03-02 10:42 by Jy?
[考研] 材料复试调剂 +4 学材料的点 2026-03-01 5/250 2026-03-02 08:26 by houyaoxu
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 13/650 2026-03-02 07:27 by 好好好1233
[考研] 0857调剂 +4 一ll半 2026-02-28 5/250 2026-03-02 02:33 by 908055542
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭