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斑马鱼原位杂交用Fast Red染色有什么方法降低背景颜色？ 已有3人参与
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之前用的染料是罗氏的BM Purple，一直没问题，现在需要另一种颜色，于是找到罗氏的Fast Red想染红色，罗氏的protocol很简单只写说用0.1M Tris-HCl, pH 8.2 溶解一片Fast Red tablet，我做出来背景颜色是很亮的黄色，上色速度也比探针快很多，但做对照组的另一个探针颜色就很明显，我在网上看别人的实验图片都没有什么背景色。 为降低背景色我在加antibody之后用MABT洗8次，又放在4°C过夜，染色过程提高温度也没有用（之前用BM Purple染色放在60°C可以加快上色速度）。 加antibody处理从3小时减到2小时也没有用。 staining buffer 是 0.1M Tris-HCl, pH要求8.2，实验室有1M，pH 8.0 的，我直接稀释10倍用了，第二次试验稀释后加了0.1% tween20，都没什么改善， 0.1M Tris 到底有什么作用啊？因为是缓冲液，稀释过程pH应该不会有很大改变吧？如果增加浓度，比如用0.5M 或者1M 的 Tris-HCl 会怎么样？ 最重要是想问还有什么方法可以减少背景色，但又不影响探针上色？或者能让探针上色速度加快？ 非常感谢！ |
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6楼2015-05-13 17:49:05
yang0071
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