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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 斑马鱼原位杂交用Fast Red染色有什么方法降低背景颜色？
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auditt

新虫 (初入文坛)

[求助] 斑马鱼原位杂交用Fast Red染色有什么方法降低背景颜色？ 已有3人参与

之前用的染料是罗氏的BM Purple，一直没问题，现在需要另一种颜色，于是找到罗氏的Fast Red想染红色，罗氏的protocol很简单只写说用0.1M Tris-HCl, pH 8.2 溶解一片Fast Red tablet，我做出来背景颜色是很亮的黄色，上色速度也比探针快很多，但做对照组的另一个探针颜色就很明显，我在网上看别人的实验图片都没有什么背景色。
为降低背景色我在加antibody之后用MABT洗8次，又放在4°C过夜，染色过程提高温度也没有用（之前用BM Purple染色放在60°C可以加快上色速度）。
加antibody处理从3小时减到2小时也没有用。
staining buffer 是 0.1M Tris-HCl, pH要求8.2，实验室有1M，pH 8.0 的，我直接稀释10倍用了，第二次试验稀释后加了0.1% tween20，都没什么改善， 0.1M Tris 到底有什么作用啊？因为是缓冲液，稀释过程pH应该不会有很大改变吧？如果增加浓度，比如用0.5M 或者1M 的 Tris-HCl 会怎么样？
最重要是想问还有什么方法可以减少背景色，但又不影响探针上色？或者能让探针上色速度加快？
非常感谢！
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1楼 2014-01-08 20:54:14
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auditt

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2014-01-09 07:55:21
用缓冲液多洗几次，
可以很好的降低背景

用缓冲液洗的次数已经从6次加到8次，最后又在缓冲液中4°C放过夜，一点改善都没有。。。
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3楼2014-01-09 23:29:18
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-09 08:52:18
用缓冲液多洗几次，
可以很好的降低背景
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2楼2014-01-09 07:55:21
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生科冲

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

在培养皿下垫张白纸试一试。应该可以。
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4楼2014-03-22 15:01:36
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shmily525520

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主，你用fast red 染的，对应探针是dig标记的还是flurescin标记的呀？
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5楼2014-10-29 20:19:15
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