应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 斑马鱼原位杂交用Fast Red染色有什么方法降低背景颜色？
51/1返回列表
查看: 2065  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

auditt

新虫 (初入文坛)

[求助] 斑马鱼原位杂交用Fast Red染色有什么方法降低背景颜色？ 已有3人参与

之前用的染料是罗氏的BM Purple，一直没问题，现在需要另一种颜色，于是找到罗氏的Fast Red想染红色，罗氏的protocol很简单只写说用0.1M Tris-HCl, pH 8.2 溶解一片Fast Red tablet，我做出来背景颜色是很亮的黄色，上色速度也比探针快很多，但做对照组的另一个探针颜色就很明显，我在网上看别人的实验图片都没有什么背景色。
为降低背景色我在加antibody之后用MABT洗8次，又放在4°C过夜，染色过程提高温度也没有用（之前用BM Purple染色放在60°C可以加快上色速度）。
加antibody处理从3小时减到2小时也没有用。
staining buffer 是 0.1M Tris-HCl, pH要求8.2，实验室有1M，pH 8.0 的，我直接稀释10倍用了，第二次试验稀释后加了0.1% tween20，都没什么改善， 0.1M Tris 到底有什么作用啊？因为是缓冲液，稀释过程pH应该不会有很大改变吧？如果增加浓度，比如用0.5M 或者1M 的 Tris-HCl 会怎么样？
最重要是想问还有什么方法可以减少背景色，但又不影响探针上色？或者能让探针上色速度加快？
非常感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-01-08 20:54:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

auditt

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2014-01-09 07:55:21
用缓冲液多洗几次，
可以很好的降低背景

用缓冲液洗的次数已经从6次加到8次，最后又在缓冲液中4°C放过夜，一点改善都没有。。。
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-09 23:29:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-09 08:52:18
用缓冲液多洗几次，
可以很好的降低背景
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-09 07:55:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生科冲

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

在培养皿下垫张白纸试一试。应该可以。
赞一下 回复此楼
4楼2014-03-22 15:01:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shmily525520

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主，你用fast red 染的，对应探针是dig标记的还是flurescin标记的呀？
赞一下 回复此楼
5楼2014-10-29 20:19:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料类求调剂 +11 wana_kiko 2026-02-28 14/700 2026-03-02 08:46 by 聪明的大松鼠
[考研] 材料复试调剂 +4 学材料的点 2026-03-01 5/250 2026-03-02 08:26 by houyaoxu
[考研] 085600 英一数二272求调剂 5+3 vida_a 2026-03-01 7/350 2026-03-02 07:51 by ms629
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +4 pin8023 2026-02-28 6/300 2026-03-02 06:35 by 汪！？！
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 292求调剂 +6 yhk_819 2026-02-28 6/300 2026-03-01 23:23 by 向上的胖东
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭