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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求细菌检测方法？
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研究生6969

金虫 (小有名气)

[求助] 求细菌检测方法？ 已有2人参与

我在做真菌发酵实验，以后准备产业化，但是经常会被细菌感染，从而造成损失，请问有什么方法或仪器可以快速检测细菌感染？
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读万卷书，不如行万里路
1楼 2014-01-05 10:20:48
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xqxqxhxh1

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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laozuzunzhe: 金币+5, good！ 2014-01-05 16:17:27
最快的方法就是用显微镜观察，观察方法如下:
1. 如果您是真菌的液体发酵，取一点发酵液直接制备成水浸片(要用载玻片)，盖上盖玻片后于显微镜下观察，此时由于水浸片没有染色，视野的光线应该调节暗一些，并且要注意用油镜观察时，水浸片的水不能进入香柏油中(要看清楚细菌的形态，一般需要用油镜，因此需要用香柏油)。如果真菌是霉菌，呈菌丝状，与细菌的常见形态：球形、杆形、螺旋形(比较少)很好区分。如果真菌是酵母菌，就一般有出芽生殖，而且比细菌大(因为真菌是真核微生物)，细菌是原核微生物，虽然细菌与酵母菌的相似点是都是单细胞，但是细菌小很多，通常在40倍的高倍镜下看不清形态，但可以在40倍的高倍镜下看清酵母菌形态，并且细菌是裂殖(即二分分裂), 与酵母菌的出芽生殖很好区分。也可以用0.2%美兰染色溶液加入发酵液(1:1)中制成染液浸片后显微镜观察，更容易鉴别。(液体发酵物，浸片观察法)
2. 如果是真菌的液体发酵，也可取一点发酵液在干净载玻片上制成染涂片后，用细菌的单染色法(最快、最简单的细菌形态染色观察方法)，涂片干燥后于显微镜下观察，要看清楚细菌的形态，也一般需要用油镜。在显微镜下的鉴别方法同步骤1所述。要注意固体发酵后期，如果是霉菌，可能孢子比较多，但是一种霉菌的孢子，形态比较固定，也容易与污染的细菌区别。(液体发酵物，涂片观察法)
3.如果是真菌的固体发酵，取一点发酵物(有培养基、菌体)，置于少量无菌生理盐水(0.85%氯化钠溶液)或无菌蒸馏水中，再按照上述1或/和2的方法镜检即可。 。(固体发酵物，浸片或涂片观察法)
4. 上述三种方法都是直接用显微镜观察，没有培养，因为您要的是最快的方法。如果有时间，想更清楚地查明是什么类型的细菌，可以用活菌检查法：就是取一定体积发酵液或一定重量固体发酵物用一定体积无菌生理盐水按照十倍稀释法稀释后，接种到培养细菌的营养琼脂培养基平板上，一般培养24小时可见菌落在平板上生长(具体长出时间也随污染细菌的生长速度而定)。再挑取不同的单菌落按照步骤1、或1、或2的方法镜检，这样您至少可以培养处污染细菌，做仔细研究，但耗时间长。(液体或固体发酵物，活菌培养+制片观察法)
5. 建个议: 下次提问最好写明什么类型发酵，什么形态真菌，以便应助者少写些字，同时也使建议更有针对性。
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研究生6969
自己啥都不懂
2楼2014-01-05 14:02:16
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xqxqxhxh1

捐助贵宾 (著名写手)

【答案】应助回帖

不好意思，刚才没有编辑好，按错了键，结果就发帖了。请以此帖子为准。
一、最快的方法就是用显微镜观察，观察方法如下:
1. 如果您是真菌的液体发酵，取一点发酵液直接制备成水浸片(要用载玻片)，盖上盖玻片后于显微镜下观察，此时由于水浸片没有染色，视野的光线应该调节暗一些，并且要注意用油镜观察时，水浸片的水不能进入香柏油中(要看清楚细菌的形态，一般需要用油镜，因此需要用香柏油)。如果真菌是霉菌，呈菌丝状，与细菌的常见形态：球形、杆形、螺旋形(比较少)很好区分。如果真菌是酵母菌，就一般有出芽生殖，而且比细菌大，因为真菌是真核微生物，细菌是原核微生物。即: 虽然细菌与酵母菌的相似点是都是单细胞，但是细菌小很多，通常在40倍的高倍镜下看不清形态，但可以在40倍的高倍镜下看清酵母菌形态，并且细菌是裂殖(即二分分裂), 与酵母菌的出芽生殖很好区分。也可以用0.2%美兰染色溶液加入发酵液(1:1)中制成染液浸片后显微镜观察，更容易鉴别。(液体发酵物，浸片观察法)
2. 如果是真菌的液体发酵，也可取一点发酵液在干净载玻片上制成涂片后，用细菌的简单染色法(最快、最简单的细菌形态染色观察方法)，涂片干燥后于显微镜下观察。要看清楚细菌的形态，也一般需要用油镜观察。在显微镜下的鉴别方法同步骤1所述。(液体发酵物，涂片观察法)
3.如果是真菌的固体发酵，取一点发酵物(有培养基、菌体)，置于少量无菌生理盐水(0.85%氯化钠溶液)或无菌蒸馏水中，再按照上述1或/和2的方法镜检即可。要注意固体发酵后期，如果是霉菌，可能孢子比较多，但是一种霉菌的孢子，形态比较固定，也容易与污染的细菌区别。(固体发酵物，浸片或涂片观察法)
二、上述三种方法都是直接用显微镜观察，没有培养，因为您要的是最快的方法。如果有时间，想更清楚地查明是什么类型的细菌，可以用活菌检查法：就是取一定体积发酵液或一定重量固体发酵物用一定体积无菌生理盐水按照十倍稀释法稀释后，接种到培养细菌的营养琼脂培养基平板上，一般培养24小时可见菌落在平板上生长(具体长出时间也随污染细菌的生长速度而定)。再挑取不同的单菌落按照步骤1、或2、或3的方法镜检，这样您至少可以培养出污染细菌，确切看到污染细菌的菌落，还可以进行准确鉴别，但耗时间长。(液体或固体发酵物，活菌培养+制片观察法)
5. 建个议: 下次提问请最好写明什么类型发酵，什么形态真菌，以便应助者少写些字，同时也使建议更有针对性。
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自己啥都不懂
3楼2014-01-05 14:26:03
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hanwei111

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
发酵罐有在线电极吧  PH、溶氧、温度，呼吸商都能及时反应异常，但不管镜检还是在线监测，种子都无法保证无菌，产业化何谈
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4楼2014-01-05 21:49:47
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研究生6969

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by xqxqxhxh1 at 2014-01-05 14:02:16
最快的方法就是用显微镜观察，观察方法如下:
1. 如果您是真菌的液体发酵，取一点发酵液直接制备成水浸片(要用载玻片)，盖上盖玻片后于显微镜下观察，此时由于水浸片没有染色，视野的光线应该调节暗一些，并且要注 ...

多谢这位大侠！非常详细！
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读万卷书，不如行万里路
5楼2014-01-06 21:08:05
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