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koreyoshitan

金虫 (初入文坛)

[求助] 关于酶切位点ClaⅠ和NotⅠ的双酶切要怎么做? 已有4人参与

因为载体上少的可怜的酶切位点,只能选择ClaⅠ和NotⅠ的位点,可是切出目的片段好困难啊……宝生物的酶和NEB的酶都用过了,还是切不出来,是什么问题呢?质粒已经换了N个了,突变也不能全部都突变了吧?酶也换过了?有什么好建议的体系吗?我在尝试一下!
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koreyoshitan

金虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by j2 at 2014-01-04 09:13:24
两个位点有多远?分开单酶切能切开吗

不远,分开单酶切了,先CLAⅠ,回收后再用notⅠ的,可以么?
3楼2014-01-04 10:49:49
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koreyoshitan

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 李小坦儿 at 2014-01-04 19:11:30
分步酶切损失会很大 每次胶回收都会损失50%左右吧
双酶切的同时应该用两个酶分别作单酶切 然后和原质粒 Marker 一起电泳 然后就可以看出来酶切效果了 哪个酶的酶切效率不高也一目了然了
你也可以换个试剂盒重新 ...

嗯,明天尝试一下,如果其中有一个酶切效率不高,之后要怎么办呢?菜虫一只,请多多指教,谢谢
5楼2014-01-04 20:46:17
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koreyoshitan

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by j2 at 2014-01-05 08:49:33
离的不远的话双酶切不容易酶切完全,一样效率低损失大。效率低那个酶先切吧。
...

嗯,我试试谢谢
7楼2014-01-05 09:09:14
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koreyoshitan

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 李小坦儿 at 2014-01-06 09:47:09
要是有一个酶切效率不高的话 只能分步酶切了 我之前做酶切也是 分步酶切损失很多 我甚至一次切四个20微升的体系 但是后来我用别的同学的试剂盒提质粒 就可以完全切开了 所以说 你就得多尝试 希望对你能有帮助吧~
...

好的,只能尝试了
10楼2014-01-06 14:52:55
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