应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR问题
51/1返回列表
查看: 1456  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

常小晶

铁虫 (小有名气)

[求助] PCR问题 已有5人参与

最近出现一些问题，PCR总是弥散的情况，也耗时一个月了。不知道给位是否出现过这样的现象，如果有希望能给予一些指导和帮助，不胜感激。鉴于所做的内容比较多，以附件的形式上传，希望大家能费心点开阅读，并群策群力。也看见小木虫上面有这样的现象出现，但是始终没有最终的总结过哪里出现了问题，我也想借这个机会，自己出现的问题进行总结，为以后的学弟学妹们做好总结，避免错误继续发生，令人抓狂。欢迎大家，踊跃讨论，最终解决问题。附件中，也许有表述不清的，请见谅。
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : pure_test_--_problem.doc
    • 2014-01-03 10:13:55, 7.61 M

» 猜你喜欢
1楼 2014-01-03 10:15:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
英文写的 不错  谢谢楼主了 楼主辛苦了
赞一下 回复此楼
生命不息奋斗不止
3楼2014-01-03 12:49:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的老师呢？
师兄师姐呢？
这么长的，谁看的下去
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-03 11:10:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolf

木虫 (著名写手)

胖虎爱唱歌

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我的妈呀，我都不知道我为什么要下载，还仔细阅读了。同学，我很佩服你解决问题的意志力，我还很佩服你的勇气，敢用英文来写，而且，英文真的是差得有水平啊。唉，我不知道该咋说了，几乎每句话都有语法用词的错误。我要是认识你，真想把你揪过来一句话一句话给你改。
回到实验上来，我本人也是做了很多很多PCR的，有时候明明做的结果还不错，换了别的样品结果就很差，往往都是引物不太好引起的，或者引物工作条件比较苛刻，稍有不慎结果就很差。
赞一下(1人) 回复此楼
我是胖虎，我是孩子王！
4楼2014-01-03 13:45:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大海一孤舟

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+10, 鼓励交流！ 2014-01-04 00:30:24
gyesang: 回帖置顶 2014-01-04 00:30:47
你的工作做的很全面，对问题的考虑也很全面；但是就PCR这样一个比较成熟的技术来讲，你的研究有些过于复杂化了。在我以前的实验室，PCR条带出现弥散一般都是很容易解决的。
先将我们以前的解决方法表述如下：
1.引物问题，这个一般是针对新合成的引物，对于已经成功做出实验的就不会过多考虑；如果新引物在一般条件没有获得很好的扩增（这个一般会用标准的质粒模板），通过梯度温度PCR仍然没有很好的扩增，那么就可以考虑重新设计引物。不过基于现在引物设计软件的强大功能，一般的引物不会出现问题，除非扩增的目的产物有很明显的特殊性。
2.样品问题，在引物没有问题的前提下，样品存在问题的可能性很高。作为模板的样品，在添加进PCR体系时很可能对整个的PCR体系产生影响；改变体系的PH，引入DNA酶的抑制物等等；一般建议PCR模板样品是直接用水溶解的，样品中不要含有太多的蛋白质杂质.
3.实验仪器和实验试剂的问题，这个两样一般不会出现问题，一台仪器要是有问题就把以前做的很好的样品作为对照就能解决啦；同理实验试剂也是的。
4.电泳问题，当然这个问题很好说明，直接看你的Maker条带是否清晰就行。
总结一下你的实验：
从你的实验数据看，你已经有过成功的实验，这样的话你仪器，试剂，电泳应该都是没有问题；主要的问题就是在的模板样品上面。
希望上面的分析对你的实验有帮助。
赞一下(3人) 回复此楼
5楼2014-01-03 14:55:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭