应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 纯化克隆
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 655  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

trizol11

木虫 (正式写手)

[求助] 纯化克隆 已有1人参与

尊敬的各位虫友：
     我现在遇到一个问题，缠绕我很久了。你们有没遇到PCR产物回收后浓度很低，无法达到克隆所需的浓度。
我刚测的回收产物1：260/280比值是3、 浓度是0.15微克每微升.2:260/280比值是1.66、浓度0.25维克每微升。

求大神指点！
回复此楼

» 猜你喜欢
任重道远……
1楼 2014-01-02 15:06:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

trizol11

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-03 00:17:16
这浓度不错呀，通常回收的浓度在几百ng/μl，做克隆只需要1微克DNA吧，你回收的产物难道没有五六微升？

你看到的我发出来的浓度是稀释50倍的结果，我再乘以50，那么1微升就是至少6微克，我用这个体系：1 载体、4 目的片段、5 BUFFER，不加水了，你觉得可以么？
赞一下 回复此楼
任重道远……
4楼2014-01-03 11:31:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
trizol11(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-01-03 09:44:48
trizol11: 金币+5 2014-01-03 11:31:35
这浓度不错呀，通常回收的浓度在几百ng/μl，做克隆只需要1微克DNA吧，你回收的产物难道没有五六微升？
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-03 00:17:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

trizol11

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-03 00:17:16
这浓度不错呀，通常回收的浓度在几百ng/μl，做克隆只需要1微克DNA吧，你回收的产物难道没有五六微升？

我做实验未能及时回复，请见谅。但是我的载体1微升是40NG，克隆的时候就是不长菌。我很苦恼……，谢谢你的帮组。
赞一下 回复此楼
任重道远……
3楼2014-01-03 11:21:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
trizol11: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-01-03 21:45:20
引用回帖:
4楼: Originally posted by trizol11 at 2014-01-03 11:31:00
你看到的我发出来的浓度是稀释50倍的结果，我再乘以50，那么1微升就是至少6微克，我用这个体系：1 载体、4 目的片段、5 BUFFER，不加水了，你觉得可以么？...

做连接的话，在10-20μl体系里加入载体50ng，目的片段根据大小计算ng数，目的片段与载体的摩尔比为3:1。如果目的片段非常小，可以用到10:1。如果不长菌，通常是酶切的问题。
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-03 16:08:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿沪9，求生物学调剂，326分 +6 刘墨墨 2026-04-04 6/300 2026-04-04 19:44 by 唐沐儿
[考研] 306求调剂 +3 hyb上名工 2026-04-02 3/150 2026-04-04 18:12 by 热情沙漠
[考研] 考研调剂 +4 美丽的youth_ 2026-04-04 5/250 2026-04-04 17:16 by imissbao
[考研] 363求调剂 +7 zh096 2026-04-04 7/350 2026-04-04 17:13 by dongzh2009
[考研] 272求调剂 +4 松柏常青5 2026-04-03 4/200 2026-04-04 17:03 by babysonlkd
[考研] 387求调剂 +4 爱吃片豆土 2026-04-03 5/250 2026-04-04 08:10 by 岸上的一条鱼
[考研] 283分材料与化工求调剂 +29 罗KAKA 2026-04-02 29/1450 2026-04-03 23:56 by userper
[考研] 357求调剂 +13 1050389037 2026-04-03 13/650 2026-04-03 22:27 by 无际的草原
[考研] 五邑大学土木工程招调剂生2026 +3 wyutj 2026-03-31 4/200 2026-04-03 18:21 by zengxj_7201
[考研] 303求调剂 +10 DLkz1314. 2026-03-30 10/500 2026-04-03 18:03 by Jimmyandyou
[考研] 085501一志愿天工大，机械专硕求调剂，跨材料 +3 33上 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:08 by 1753564080
[考研] 调剂 +3 osbbx 2026-04-02 3/150 2026-04-03 07:47 by cc8418
[考研] 一志愿华南师范大学-22408计算机-292分-求华南师范大学调剂 +4 爱读书的小鳄鱼 2026-04-02 4/200 2026-04-02 18:35 by 求调剂zz
[考研] 282求调剂 +13 呼吸都是减肥 2026-04-01 13/650 2026-04-02 14:10 by baoball
[考研] 337求调剂 +11 《树》 2026-03-29 11/550 2026-04-02 10:20 by 不吃魚的貓
[考研] 286求调剂 +5 Sa67890. 2026-04-01 7/350 2026-04-01 19:50 by 6781022
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-03-30 13/650 2026-04-01 17:00 by 七度不信任
[考研] 0703一志愿南师大334求调剂 +4 seven7yu 2026-03-30 4/200 2026-04-01 16:10 by oooqiao
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:35 by wangjy2002
[考研] 297 地理学070500 复试求调剂 +3 小圆圈圈ooo 2026-03-30 3/150 2026-03-30 21:05 by 余震yz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭