应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 纯化克隆
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
61/1返回列表
查看: 659  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

trizol11

木虫 (正式写手)

[求助] 纯化克隆 已有1人参与

尊敬的各位虫友：
     我现在遇到一个问题，缠绕我很久了。你们有没遇到PCR产物回收后浓度很低，无法达到克隆所需的浓度。
我刚测的回收产物1：260/280比值是3、 浓度是0.15微克每微升.2:260/280比值是1.66、浓度0.25维克每微升。

求大神指点！
回复此楼

» 猜你喜欢
任重道远……
1楼 2014-01-02 15:06:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
trizol11(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-01-03 09:44:48
trizol11: 金币+5 2014-01-03 11:31:35
这浓度不错呀，通常回收的浓度在几百ng/μl，做克隆只需要1微克DNA吧，你回收的产物难道没有五六微升？
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-03 00:17:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

trizol11

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-03 00:17:16
这浓度不错呀，通常回收的浓度在几百ng/μl，做克隆只需要1微克DNA吧，你回收的产物难道没有五六微升？

我做实验未能及时回复，请见谅。但是我的载体1微升是40NG，克隆的时候就是不长菌。我很苦恼……，谢谢你的帮组。
赞一下 回复此楼
任重道远……
3楼2014-01-03 11:21:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

trizol11

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-03 00:17:16
这浓度不错呀，通常回收的浓度在几百ng/μl，做克隆只需要1微克DNA吧，你回收的产物难道没有五六微升？

你看到的我发出来的浓度是稀释50倍的结果，我再乘以50，那么1微升就是至少6微克，我用这个体系：1 载体、4 目的片段、5 BUFFER，不加水了，你觉得可以么？
赞一下 回复此楼
任重道远……
4楼2014-01-03 11:31:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
trizol11: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-01-03 21:45:20
引用回帖:
4楼: Originally posted by trizol11 at 2014-01-03 11:31:00
你看到的我发出来的浓度是稀释50倍的结果，我再乘以50，那么1微升就是至少6微克，我用这个体系：1 载体、4 目的片段、5 BUFFER，不加水了，你觉得可以么？...

做连接的话，在10-20μl体系里加入载体50ng，目的片段根据大小计算ng数，目的片段与载体的摩尔比为3:1。如果目的片段非常小，可以用到10:1。如果不长菌，通常是酶切的问题。
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-03 16:08:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

trizol11

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-03 16:08:54
做连接的话，在10-20μl体系里加入载体50ng，目的片段根据大小计算ng数，目的片段与载体的摩尔比为3:1。如果目的片段非常小，可以用到10:1。如果不长菌，通常是酶切的问题。...

嗯，谢谢。
回复此楼
任重道远……
6楼2014-01-03 21:45:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 trizol11 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 302分求调剂 一志愿安徽大学085601 +4 zyx上岸！ 2026-04-04 4/200 2026-04-04 23:28 by wxiongid
[考研] 304求调剂（085602，过四级，一志愿985） +6 化工人999 2026-04-04 6/300 2026-04-04 22:37 by 啊李999
[考研] 292分，材料与化工，申请调剂 +22 程晴之 2026-04-01 26/1300 2026-04-04 22:03 by hemengdong
[考研] 求调剂 +6 熊二想上岸 2026-04-04 6/300 2026-04-04 20:43 by imissbao
[考研] 考研调剂 +4 美丽的youth_ 2026-04-04 5/250 2026-04-04 17:16 by imissbao
[考研] 0703求调剂 +6 zizimo 2026-03-31 6/300 2026-04-04 14:16 by 无际的草原
[考研] 400分求调剂 +3 尴尬且挠头 2026-04-04 3/150 2026-04-04 08:41 by jp9609
[考研] 343求调剂085601 +6 要努力学习x 2026-03-29 7/350 2026-04-03 19:49 by 百灵童888
[考研] 301求调剂 +14 A_JiXing 2026-04-01 14/700 2026-04-03 18:31 by ls刘帅
[考研] 372分材料与化工（085600）一志愿湖南大学求调剂 +3 蓝笺片 2026-04-03 4/200 2026-04-03 17:58 by Jimmyandyou
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +7 困困困困坤坤 2026-04-02 7/350 2026-04-03 17:26 by Yuena_Wang
[考研] 材料专硕322分 +13 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 13/650 2026-04-03 16:08 by 哦哦123
[考研] 313求调剂 +3 ～微微凉～ 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:25 by 啵啵啵0119
[考研] 抱歉 +5 田洪有 2026-03-30 5/250 2026-04-03 10:24 by linyelide
[考研] 298求B区调剂 +4 zzz，，r 2026-04-02 5/250 2026-04-02 12:17 by 土木硕士招生
[考研] 279求调剂 +6 学而思兮知 2026-04-01 6/300 2026-04-02 09:16 by vgtyfty
[考研] 求调剂 +4 DADA怪 2026-03-31 4/200 2026-04-01 14:30 by ZXlzxl0425
[考研] 085410人工智能 初试316分 求调剂 +3 残星拂曙 2026-03-31 3/150 2026-04-01 11:09 by 小熊raider
[考研] 339求调剂 +5 zjjkt 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:18 by JourneyLucky
[考研] 0703化学321分求调剂 +10 三dd. 2026-03-30 11/550 2026-03-30 19:24 by markhwc
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭