应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 纯化克隆
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
61/1返回列表
查看: 653  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

trizol11

木虫 (正式写手)

[求助] 纯化克隆 已有1人参与

尊敬的各位虫友：
     我现在遇到一个问题，缠绕我很久了。你们有没遇到PCR产物回收后浓度很低，无法达到克隆所需的浓度。
我刚测的回收产物1：260/280比值是3、 浓度是0.15微克每微升.2:260/280比值是1.66、浓度0.25维克每微升。

求大神指点！
回复此楼

» 猜你喜欢
任重道远……
1楼 2014-01-02 15:06:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
trizol11(kx444555代发): 金币+2, 鼓励交流 2014-01-03 09:44:48
trizol11: 金币+5 2014-01-03 11:31:35
这浓度不错呀，通常回收的浓度在几百ng/μl，做克隆只需要1微克DNA吧，你回收的产物难道没有五六微升？
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-03 00:17:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

trizol11

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-03 00:17:16
这浓度不错呀，通常回收的浓度在几百ng/μl，做克隆只需要1微克DNA吧，你回收的产物难道没有五六微升？

我做实验未能及时回复，请见谅。但是我的载体1微升是40NG，克隆的时候就是不长菌。我很苦恼……，谢谢你的帮组。
赞一下 回复此楼
任重道远……
3楼2014-01-03 11:21:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

trizol11

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-03 00:17:16
这浓度不错呀，通常回收的浓度在几百ng/μl，做克隆只需要1微克DNA吧，你回收的产物难道没有五六微升？

你看到的我发出来的浓度是稀释50倍的结果，我再乘以50，那么1微升就是至少6微克，我用这个体系：1 载体、4 目的片段、5 BUFFER，不加水了，你觉得可以么？
赞一下 回复此楼
任重道远……
4楼2014-01-03 11:31:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
trizol11: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-01-03 21:45:20
引用回帖:
4楼: Originally posted by trizol11 at 2014-01-03 11:31:00
你看到的我发出来的浓度是稀释50倍的结果，我再乘以50，那么1微升就是至少6微克，我用这个体系：1 载体、4 目的片段、5 BUFFER，不加水了，你觉得可以么？...

做连接的话，在10-20μl体系里加入载体50ng，目的片段根据大小计算ng数，目的片段与载体的摩尔比为3:1。如果目的片段非常小，可以用到10:1。如果不长菌，通常是酶切的问题。
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-03 16:08:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

trizol11

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-03 16:08:54
做连接的话，在10-20μl体系里加入载体50ng，目的片段根据大小计算ng数，目的片段与载体的摩尔比为3:1。如果目的片段非常小，可以用到10:1。如果不长菌，通常是酶切的问题。...

嗯，谢谢。
回复此楼
任重道远……
6楼2014-01-03 21:45:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 trizol11 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +5 革微桂 2026-04-04 5/250 2026-04-04 20:52 by sialons
[考研] 284求调剂 +4 徐同学_001 2026-04-04 4/200 2026-04-04 20:12 by babysonlkd
[考研] 一志愿华中农业大学0710（A）初试329分 求调剂 +3 一名26考研生 2026-04-04 3/150 2026-04-04 17:10 by dongzh2009
[考研] 材料化工306分找合适调剂 +10 沧海轻舟e 2026-04-04 10/500 2026-04-04 16:57 by dongzh2009
[考研] 085701求调剂 +7 龚禹铭 2026-04-04 8/400 2026-04-04 13:49 by 小小树2024
[考研] 292分，材料与化工，申请调剂 +21 程晴之 2026-04-01 25/1250 2026-04-04 11:01 by hmn_wj
[基金申请] 同年申报，是不是就不会派给你函评本子了？ +4 redcom 2026-03-29 4/200 2026-04-04 10:08 by kudofaye
[考研] 288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工 +12 洛神哥哥 2026-04-03 12/600 2026-04-04 09:22 by 有机小民工
[考研] 283分材料与化工求调剂 +29 罗KAKA 2026-04-02 29/1450 2026-04-03 23:56 by userper
[考研] 考研调剂 +5 小sun要好运 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:43 by 啵啵啵0119
[考研] 工科341分调剂 +3 洛多罗 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:20 by 1753564080
[考研] 282求调剂 +5 呼吸都是减肥 2026-03-31 5/250 2026-04-03 12:03 by 1753564080
[考研] 275求调剂 +14 waltzh 2026-04-01 14/700 2026-04-03 11:24 by qqq850810
[考研] 262求调剂 +6 励志一定发文章 2026-04-02 7/350 2026-04-03 09:54 by linyelide
[考研] 085600，320分求调剂 +6 大馋小子 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:54 by dongzh2009
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +4 哇呼哼呼哼 2026-04-02 4/200 2026-04-02 13:10 by yulian1987
[考研] 求调剂0703 +5 周嘉尧 2026-03-31 8/400 2026-04-01 20:32 by ltltkkk
[考研] 375求调剂 +7 雨夏整夜 2026-03-29 7/350 2026-03-31 18:52 by xhai2011
[考研] 083000环境科学与工程调剂，总分281 +4 橙子（胜意） 2026-03-30 4/200 2026-03-31 00:44 by Linzejun
[考研] 调剂考研 +3 王杰一 2026-03-29 3/150 2026-03-29 08:09 by fmesaito
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭