24小时热门版块排行榜    

查看: 1692  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

a3200649

铜虫 (正式写手)

[求助] 做细菌的双重荧光pcr 已有1人参与

请问做2种细菌的双重荧光pcr,我用的是菌种,必须要制备标准品吗(进行PCR扩增,并将目的片段克隆于pMD18-T,
构建重组质粒,提取质粒进行PCR分析和测序验证)?必须要这一步吗?

如果不制备标准品,直接提取菌种DNA,然后并利用OD260nm/OD280nm比值来确定DNA的纯度,然后进行梯度稀释,测检测限,这样可以吗?
回复此楼
希望大家多多交流
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by a3200649 at 2014-01-03 14:56:53
没有对照啊,我看了好几篇,关于设计普通pcr引物的一个问题,我查到一个特异性基因序列,然后从里面找了一小段序列(位置1600-1650),然后设计的时候就针对这一小段序列吗?还是大于这一小段序列来设计(也就是例 ...

关键只是别人都已经做了你还继续做会怀疑有没有意义而已。不明白具体是做什么,不能给直接的意见。
那段序列必须是特异地代表了那个基因,其他的任何序列都没有或者用引物不能检测出来
你的日子如何,你的力量也必如何!
15楼2014-01-06 14:08:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
a3200649: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2014-01-02 09:37:52
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-02 13:36:02
看看你的目的是什么,如果只是看看荧光的,有没有标准品都无所谓。但是涉及到发文章论文之类的,没有标准品谁确定你检测出的荧光就是你说的哪个?起码有个对照。
你的日子如何,你的力量也必如何!
2楼2014-01-02 09:30:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a3200649

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2014-01-02 09:30:51
看看你的目的是什么,如果只是看看荧光的,有没有标准品都无所谓。但是涉及到发文章论文之类的,没有标准品谁确定你检测出的荧光就是你说的哪个?起码有个对照。

明白!谢谢
希望大家多多交流
3楼2014-01-02 09:37:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a3200649

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2014-01-02 09:30:51
看看你的目的是什么,如果只是看看荧光的,有没有标准品都无所谓。但是涉及到发文章论文之类的,没有标准品谁确定你检测出的荧光就是你说的哪个?起码有个对照。

我说的已知需要检测的菌种可不可以算是标准品呢?
希望大家多多交流
4楼2014-01-02 09:40:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 让我中一个面上吧! +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 19:34 by lXgU0RvNTDC9
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 4/200 2026-08-23 15:30 by KM5EcsNQRBPn
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 10/500 2026-08-23 07:17 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 5/250 2026-08-23 03:52 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
信息提示
请填处理意见