24小时热门版块排行榜    

查看: 1373  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

a3200649

铜虫 (正式写手)

[求助] 做细菌的双重荧光pcr 已有1人参与

请问做2种细菌的双重荧光pcr,我用的是菌种,必须要制备标准品吗(进行PCR扩增,并将目的片段克隆于pMD18-T,
构建重组质粒,提取质粒进行PCR分析和测序验证)?必须要这一步吗?

如果不制备标准品,直接提取菌种DNA,然后并利用OD260nm/OD280nm比值来确定DNA的纯度,然后进行梯度稀释,测检测限,这样可以吗?
回复此楼
希望大家多多交流
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by a3200649 at 2014-01-03 14:56:53
没有对照啊,我看了好几篇,关于设计普通pcr引物的一个问题,我查到一个特异性基因序列,然后从里面找了一小段序列(位置1600-1650),然后设计的时候就针对这一小段序列吗?还是大于这一小段序列来设计(也就是例 ...

关键只是别人都已经做了你还继续做会怀疑有没有意义而已。不明白具体是做什么,不能给直接的意见。
那段序列必须是特异地代表了那个基因,其他的任何序列都没有或者用引物不能检测出来
你的日子如何,你的力量也必如何!
15楼2014-01-06 14:08:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
a3200649: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2014-01-02 09:37:52
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-02 13:36:02
看看你的目的是什么,如果只是看看荧光的,有没有标准品都无所谓。但是涉及到发文章论文之类的,没有标准品谁确定你检测出的荧光就是你说的哪个?起码有个对照。
你的日子如何,你的力量也必如何!
2楼2014-01-02 09:30:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a3200649

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2014-01-02 09:30:51
看看你的目的是什么,如果只是看看荧光的,有没有标准品都无所谓。但是涉及到发文章论文之类的,没有标准品谁确定你检测出的荧光就是你说的哪个?起码有个对照。

明白!谢谢
希望大家多多交流
3楼2014-01-02 09:37:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a3200649

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2014-01-02 09:30:51
看看你的目的是什么,如果只是看看荧光的,有没有标准品都无所谓。但是涉及到发文章论文之类的,没有标准品谁确定你检测出的荧光就是你说的哪个?起码有个对照。

我说的已知需要检测的菌种可不可以算是标准品呢?
希望大家多多交流
4楼2014-01-02 09:40:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见