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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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destinygazer

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助,绝对定量PCR低浓度的标准品ct值几乎一致是什么原因? 已有3人参与

绝对定量的实验中,为什么我低浓度的几个的CT值都差不多啊?稀释倍数是10的6次方到10的0次方。可是从10的2次方开始,几个标准品的ct值都几乎在一样的25,26。请问这是什么原因呢?
用的是ABI7300的机器。
求助,绝对定量PCR低浓度的标准品ct值几乎一致是什么原因?
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求助,绝对定量PCR低浓度的标准品ct值几乎一致是什么原因?-1
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求助,绝对定量PCR低浓度的标准品ct值几乎一致是什么原因?-3
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-01 00:48:23
模板浓度太小,扩增不正常。一般做标准曲线5倍稀释就可以了,CT值最好在15-30之间。
2楼2014-01-01 00:25:39
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destinygazer

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2014-01-01 00:25:39
模板浓度太小,扩增不正常。一般做标准曲线5倍稀释就可以了,CT值最好在15-30之间。

可是我师兄也是这样做的,他用的是7500,可能试剂不一样,但是他都有结果的。是不是试剂的问题导致扩增不正常呢?
3楼2014-01-03 11:33:49
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意萧02

木虫 (正式写手)

谢谢楼主分享!!!
4楼2014-01-03 14:55:27
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bullfrog325

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一种可能是有底浓度的模板污染, 另一种可能是引物不好容易形成二具体
5楼2014-01-03 22:59:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by destinygazer at 2014-01-03 11:33:49
可是我师兄也是这样做的,他用的是7500,可能试剂不一样,但是他都有结果的。是不是试剂的问题导致扩增不正常呢?...

一般不会。比较有信誉的大公司的试剂是有保证的。如果你怀疑试剂的问题,为什么不用与师兄相同的试剂做?
看你的扩增曲线就知道,有些反应不正常。扩增你的目的基因时用浓度最高的CT值是16,如果再稀释10^6(最稀的样品),CT的理论值是36。CT值高于35基本上是不可信的数据了。何况这是在扩增效率为100%的理想情况,低浓度的模板的扩增效率会下降。如果你非要10倍稀释模板,通常的标准曲线上只能有4个点。用5倍稀释可以比较理想的满足CT在15-30之间取5-6个点。
6楼2014-01-04 03:43:19
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