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why0393

金虫 (正式写手)

[交流] PCR引物

各位分子方面的大虾帮忙看看啊，本人根据几株公布BPIV3全序分析的保守区设计的引物，长23bp，昨天做RT-PCR结果见附图。
引物区间目的条带318bp，引物Tm值57℃，PCR退火温度54℃
本人分析原因如下：
1、引物二聚体：不可能，因为其他三个泳道没有出现
2、错配：不可能，oligo7分析错配区间 没有低于100bp的
3、其他：等待各位大侠指点啊

本人初次接触分子实验，单抗方面的
PCR引物
40WJ[PE1PRZ[WLL7VPNNLNG.jpg
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1楼 2013-12-30 09:50:17
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lidonghong

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
why0393(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-30 18:00:32
why0393: 金币+5 2014-01-02 16:58:57
从图来看，pi3是扩增出来了，但有非特异性扩增，退火温度低了点，可提高。后三孔就没有出来，先做个梯度PCR，摸摸条件，看看这五个样本是不是还是不会出来，如果不出来的话，那基本上可能是你引物的问题，当然也不排除体系、扩增酶等其他条件....
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2楼2013-12-30 17:29:21
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mzhyan

至尊木虫 (文坛精英)
★
why0393(金币+1): 谢谢参与
blessing
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42楼2013-12-30 19:53:44
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★
why0393(金币+1): 谢谢参与
引物少加点~
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46楼2013-12-31 01:37:29
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why0393

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lidonghong at 2013-12-30 17:29:21
从图来看，pi3是扩增出来了，但有非特异性扩增，退火温度低了点，可提高。后三孔就没有出来，先做个梯度PCR，摸摸条件，看看这五个样本是不是还是不会出来，如果不出来的话，那基本上可能是你引物的问题，当然也不排 ...

身边的分子方面的同事也这么说，正在尝试
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47楼2014-01-02 16:59:33
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why0393

金虫 (正式写手)
引用回帖:
46楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-31 01:37:29
引物少加点~

嗯，也尝试一下
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48楼2014-01-02 17:00:10
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lidonghong

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
47楼: Originally posted by why0393 at 2014-01-02 16:59:33
身边的分子方面的同事也这么说，正在尝试...

好，预祝你实验早日成功！
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49楼2014-01-03 08:08:27
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userhung3楼
2013-12-30 17:50   回复  
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wlxiao4楼
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天涯20125楼
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taochao13楼
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hunjing126815楼
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yingying158843楼
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kiss2008553745楼
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why039350楼
2014-01-03 16:55   回复  
引用回帖:
49楼: Originally posted by lidonghong at 2014-01-03 08:08:27 好，预祝你实验早日成功！...

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