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why0393

金虫 (正式写手)


[交流] PCR引物

各位分子方面的大虾帮忙看看啊,本人根据几株公布BPIV3全序分析的保守区设计的引物,长23bp,昨天做RT-PCR结果见附图。
引物区间目的条带318bp,引物Tm值57℃,PCR退火温度54℃
本人分析原因如下:
1、引物二聚体:不可能,因为其他三个泳道没有出现
2、错配:不可能,oligo7分析错配区间 没有低于100bp的
3、其他:等待各位大侠指点啊

本人初次接触分子实验,单抗方面的
PCR引物
40WJ[PE1PRZ[WLL7VPNNLNG.jpg
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lidonghong

金虫 (正式写手)


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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-30 18:00:32
why0393: 金币+5 2014-01-02 16:58:57
从图来看,pi3是扩增出来了,但有非特异性扩增,退火温度低了点,可提高。后三孔就没有出来,先做个梯度PCR,摸摸条件,看看这五个样本是不是还是不会出来,如果不出来的话,那基本上可能是你引物的问题,当然也不排除体系、扩增酶等其他条件....
2楼2013-12-30 17:29:21
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mzhyan

至尊木虫 (文坛精英)


★
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blessing
42楼2013-12-30 19:53:44
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luwei13566

木虫 (正式写手)


★
why0393(金币+1): 谢谢参与
引物少加点~
46楼2013-12-31 01:37:29
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why0393

金虫 (正式写手)


引用回帖:
2楼: Originally posted by lidonghong at 2013-12-30 17:29:21
从图来看,pi3是扩增出来了,但有非特异性扩增,退火温度低了点,可提高。后三孔就没有出来,先做个梯度PCR,摸摸条件,看看这五个样本是不是还是不会出来,如果不出来的话,那基本上可能是你引物的问题,当然也不排 ...

身边的分子方面的同事也这么说,正在尝试
47楼2014-01-02 16:59:33
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why0393

金虫 (正式写手)


引用回帖:
46楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-31 01:37:29
引物少加点~

嗯,也尝试一下
48楼2014-01-02 17:00:10
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lidonghong

金虫 (正式写手)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
47楼: Originally posted by why0393 at 2014-01-02 16:59:33
身边的分子方面的同事也这么说,正在尝试...

好,预祝你实验早日成功!
49楼2014-01-03 08:08:27
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userhung3楼
2013-12-30 17:50   回复  
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wlxiao4楼
2013-12-30 17:52   回复  
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laom20137楼
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假大空9楼
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yaoyao14510楼
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taochao13楼
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army88888814楼
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chuans_ab16楼
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toooo_oool19楼
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zhangdong322楼
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晓布熊25楼
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yaomeina36楼
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林川39楼
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longwaygun41楼
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祝福
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flyxu44楼
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why039350楼
2014-01-03 16:55   回复  
引用回帖:
49楼: Originally posted by lidonghong at 2014-01-03 08:08:27 好,预祝你实验早日成功!...

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