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why0393

金虫 (正式写手)

[交流] PCR引物

各位分子方面的大虾帮忙看看啊，本人根据几株公布BPIV3全序分析的保守区设计的引物，长23bp，昨天做RT-PCR结果见附图。
引物区间目的条带318bp，引物Tm值57℃，PCR退火温度54℃
本人分析原因如下：
1、引物二聚体：不可能，因为其他三个泳道没有出现
2、错配：不可能，oligo7分析错配区间 没有低于100bp的
3、其他：等待各位大侠指点啊

本人初次接触分子实验，单抗方面的
PCR引物
40WJ[PE1PRZ[WLL7VPNNLNG.jpg
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1楼 2013-12-30 09:50:17
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why0393

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lidonghong at 2013-12-30 17:29:21
从图来看，pi3是扩增出来了，但有非特异性扩增，退火温度低了点，可提高。后三孔就没有出来，先做个梯度PCR，摸摸条件，看看这五个样本是不是还是不会出来，如果不出来的话，那基本上可能是你引物的问题，当然也不排 ...

身边的分子方面的同事也这么说，正在尝试
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47楼2014-01-02 16:59:33
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lidonghong

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
why0393(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-30 18:00:32
why0393: 金币+5 2014-01-02 16:58:57
从图来看，pi3是扩增出来了，但有非特异性扩增，退火温度低了点，可提高。后三孔就没有出来，先做个梯度PCR，摸摸条件，看看这五个样本是不是还是不会出来，如果不出来的话，那基本上可能是你引物的问题，当然也不排除体系、扩增酶等其他条件....
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-30 17:29:21
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