8楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-27 23:15:06
primeSTAR系列的保真度非常高，扩增时间也短，从我的样品测序经验来说，这个酶没问题~~点突变试剂盒里的那个酶从名字上来看保真度肯定不会差~用那个Pyrobest酶P出来可以上T载体吗？还有你如果做点突变的话，循环数 ...

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 11:13:24
有可能是测序的问题。检查一下测序峰图，重叠部分以测序质量高的为准。非重叠部分也有可能由于质量不高而误读，人工纠正一些程序拼接造成的错误。此外，你多送几个克隆去测序。

10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-28 00:14:23
酶最好用盒子给配的。其它高保真酶也可以用，不过酶作用条件和缓冲液体系可能不完全相同。...

12楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2013-12-28 12:11:19
离我点突变的位置很近，总是TTT处少一个T，不会是我引物设计的问题吧？但是今天我也拿到了一个比较满意的目的菌株，我以后应该引物设计注意点什么呢？主要是我在突变位点设计引物，突变位点尽可能的靠近primer F中 ...

15楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-28 14:49:00
1.首先一般公司设计的引物都存在一个纯度的问题，打个比方说，假如公司合成了100个引物，可能95个和你设计的序列一致，有5个不一致，本来合成DNA的准确度就不如测序高，哪个公司都不会保证合成的引物是100%的纯度。 ...

16楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2013-12-30 12:50:51
哦，谢谢啦，那用TE buffer一般的PCR，酶切什么的应该都不会有影响吧？什么情况下才会影响后续试验操作呢？...

17楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-30 13:07:51
PCR完一般都有回收的步骤，比如说割胶回收或者纯化，经过纯化后的做酶切一类的绝对没问题，PCR完就酶切的不知道行不行，因为我从来没这样做过~~至少体系里残留的buffer和taq酶，对内切酶绝对会有影响的...