应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于点突变
192/2返回列表上一页12
查看: 1735  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-27 23:15:06
primeSTAR系列的保真度非常高，扩增时间也短，从我的样品测序经验来说，这个酶没问题~~点突变试剂盒里的那个酶从名字上来看保真度肯定不会差~用那个Pyrobest酶P出来可以上T载体吗？还有你如果做点突变的话，循环数 ...

嗯，谢谢大虾，我今天已经拿到了target site突变的菌株，非常感谢，以后还要多请教哈！
赞一下 回复此楼
没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
11楼2013-12-28 12:08:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
内容已删除
回复此楼
没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
12楼2013-12-28 12:11:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-26 11:13:24
有可能是测序的问题。检查一下测序峰图，重叠部分以测序质量高的为准。非重叠部分也有可能由于质量不高而误读，人工纠正一些程序拼接造成的错误。此外，你多送几个克隆去测序。

嗯，我仔细检查了一下测序峰，其实测序结果非常好，非常单一没有重叠，感觉不大像是测序的结果，不过还是谢谢您的提醒！
赞一下 回复此楼
没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
13楼2013-12-28 12:15:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-28 00:14:23
酶最好用盒子给配的。其它高保真酶也可以用，不过酶作用条件和缓冲液体系可能不完全相同。...

谢谢您，多谢提醒！
回复此楼
没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
14楼2013-12-28 12:16:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-28 21:08:43
引用回帖:
12楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2013-12-28 12:11:19
离我点突变的位置很近，总是TTT处少一个T，不会是我引物设计的问题吧？但是今天我也拿到了一个比较满意的目的菌株，我以后应该引物设计注意点什么呢？主要是我在突变位点设计引物，突变位点尽可能的靠近primer F中 ...

1.首先一般公司设计的引物都存在一个纯度的问题，打个比方说，假如公司合成了100个引物，可能95个和你设计的序列一致，有5个不一致，本来合成DNA的准确度就不如测序高，哪个公司都不会保证合成的引物是100%的纯度。
2.你溶解引物的过程中出现了问题，一般溶解引物无论哪个手册都是推荐TE buffer溶解~，如果想省事用Q水溶解，稀释完不知道多分装几管，拿着一管引物反复冻融使用的话，这样在引物里丢片段的现象非常容易发生！
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
15楼2013-12-28 14:49:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-28 14:49:00
1.首先一般公司设计的引物都存在一个纯度的问题，打个比方说，假如公司合成了100个引物，可能95个和你设计的序列一致，有5个不一致，本来合成DNA的准确度就不如测序高，哪个公司都不会保证合成的引物是100%的纯度。 ...

哦，谢谢啦，那用TE buffer一般的PCR，酶切什么的应该都不会有影响吧？什么情况下才会影响后续试验操作呢？
赞一下 回复此楼
没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
16楼2013-12-30 12:50:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2013-12-30 12:50:51
哦，谢谢啦，那用TE buffer一般的PCR，酶切什么的应该都不会有影响吧？什么情况下才会影响后续试验操作呢？...

PCR完一般都有回收的步骤，比如说割胶回收或者纯化，经过纯化后的做酶切一类的绝对没问题，PCR完就酶切的不知道行不行，因为我从来没这样做过~~至少体系里残留的buffer和taq酶，对内切酶绝对会有影响的
赞一下(1人) 回复此楼
大家相互帮助哈
17楼2013-12-30 13:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-30 13:07:51
PCR完一般都有回收的步骤，比如说割胶回收或者纯化，经过纯化后的做酶切一类的绝对没问题，PCR完就酶切的不知道行不行，因为我从来没这样做过~~至少体系里残留的buffer和taq酶，对内切酶绝对会有影响的...

谢谢啦
回复此楼
没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
18楼2013-12-31 16:24:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sd3824289

木虫 (正式写手)
如果问题很多可以直接送去合成！这些问题我也出现过，如果出现非目的突变要看一下编码的蛋白质有没有发生变化，如果变化了，就得重新来！
赞一下 回复此楼
坚持，就像流星，即使知道最后的结果，也要勇敢的走到最后！
19楼2013-12-31 17:09:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weiyuanzheng 的主题更新
192/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 04:07 by 6vVgjDL4CnGu
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 3/150 2026-08-08 03:47 by 6vVgjDL4CnGu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +9 且听虎啸 2026-08-07 12/600 2026-08-07 21:53 by 理想三旬2025
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭