应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助overlap技术
51/1返回列表
查看: 2076  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yanjinyuan

银虫 (小有名气)

[求助] 求助overlap技术 已有2人参与

大家帮忙分析一下，我要overlap，启动子区直接从基因组扩增约4k，而编码区从cDNA上好不容易扩增约1k, 回收后条带都很单一而较亮，但是overlap以后，完全没有条带，试过touchdown,也不行。大家帮忙看看
求助overlap技术
12.24  ser4 overlap_副本.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
加油，早点毕业
1楼 2013-12-25 22:45:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
你片段有点太大了，还是加酶切位点，一步步慢慢做吧，overlap虽然快但不容易做出来。
赞一下 回复此楼
hehe
8楼2013-12-31 09:11:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-26 13:04:47
你扩增的片段有些大，做overlap我们一般都不超过3kb。你所需启动子比基因区域大建议你让这两个片段的重叠区域大一些，另外调整好这两个片段的浓度，一般不要太大稀释上10倍左右1:1混合。扩这大片段选用一些好点的酶扩增。若不行建议加个酶切位点吧。毕竟片段有点大。
赞一下 回复此楼
hehe
2楼2013-12-26 11:41:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanjinyuan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2013-12-26 11:41:33
你扩增的片段有些大，做overlap我们一般都不超过3kb。你所需启动子比基因区域大建议你让这两个片段的重叠区域大一些，另外调整好这两个片段的浓度，一般不要太大稀释上10倍左右1:1混合。扩这大片段选用一些好点的酶 ...

我设置的是这样的
启动子
1上游     CGGGATCCCGTTCCCCCCCTCTGACGACTACT
2下游     AGAAGCGTCTCGTCGATCAT ctggacaaaaaaagtgattt

编码区

3上游引物  aaatcactttttttgtccagATGATCGACGAGACGCTTCT
4下游引物  GGGGTACCCCTCAATAATCGTGAATAAGGC
还有做overlap的两个模板要稀释吗？
赞一下 回复此楼
加油，早点毕业
3楼2013-12-26 12:19:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-26 14:57:04
换一换酶看看，我们实验室之前也做OVER-LAP，换了全式金的酶后很容易的连上了，约3K大小的
赞一下(1人) 回复此楼
坚持不懈,终会成功!
4楼2013-12-26 13:41:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:39 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 06:35 by ZPa0EcMwuECS
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 06:10 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 06:02 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 05:40 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 02:09 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:45 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:34 by ZPa0EcMwuECS
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 01:14 by ZPa0EcMwuECS
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +9 苏东坡二世 2026-08-23 9/450 2026-08-29 14:41 by hustersqt
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭