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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RT-PCR最最基本的入门
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学不会选择

捐助贵宾 (初入文坛)

[求助] RT-PCR最最基本的入门 已有2人参与

大家好，最近要求做RT-PCR,本人对分子生物一窍不通，看资料也看不懂。实验目的是想通过RT-PCR检测外加的菌在土壤里的定殖状况，请问一下该怎么入手？是木霉菌，真菌哦。谢谢，50金币哦！
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1楼 2013-12-25 20:14:52
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
学不会选择(kx444555代发): 金币+5, 鼓励交流 2013-12-26 08:31:17
学不会选择: 金币+5 2013-12-26 11:18:28
我们有做豆豉的。在豆豉里面提总菌的RNA，然后做RT-PCR，土壤我不太了解，但是我先如果你的土壤无菌的话好做，可以提取总RNA，进行逆转录。真菌的话可以做18S，半定量，定量也行，检测18S的丰度从而大概知道真菌的定殖情况。因为通常来说18S是可以作为内参的（个人观点）。
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生命不息奋斗不止
2楼2013-12-25 21:47:11
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学不会选择

捐助贵宾 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2013-12-25 21:47:11
我们有做豆豉的。在豆豉里面提总菌的RNA，然后做RT-PCR，土壤我不太了解，但是我先如果你的土壤无菌的话好做，可以提取总RNA，进行逆转录。真菌的话可以做18S，半定量，定量也行，检测18S的丰度从而大概知道真菌的定 ...

想直接做木霉的，引物怎么找啊？
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3楼2013-12-25 22:07:48
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冷雁孤旅

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 学不会选择 at 2013-12-25 22:07:48
想直接做木霉的，引物怎么找啊？...

我没有做过木霉，你可以去查一下木霉的18S引物的序列。（包括半定量的序列和定量的引物序列，一般sci文献上有的 你都可以查到）
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生命不息奋斗不止
4楼2013-12-25 22:19:48
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学不会选择

捐助贵宾 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冷雁孤旅 at 2013-12-25 22:19:48
我没有做过木霉，你可以去查一下木霉的18S引物的序列。（包括半定量的序列和定量的引物序列，一般sci文献上有的 你都可以查到）...

恩 好的 谢谢 再看看吧
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5楼2013-12-26 11:17:40
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-26 15:42:36
RT-PCR最关键的步骤还是在最开始RNA的提取上，看家基因的话，18rS就没问题。
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大家相互帮助哈
6楼2013-12-26 15:39:52
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学不会选择

捐助贵宾 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by luwei13566 at 2013-12-26 15:39:52
RT-PCR最关键的步骤还是在最开始RNA的提取上，看家基因的话，18rS就没问题。

怎么寻找合适的引物呢
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7楼2013-12-26 18:13:46
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
学不会选择: 金币+5, ★有帮助 2013-12-28 12:54:41
不做半定量不太清楚，但是你到数据库里找一找别人木霉属做半定量的文章，尽量是SCI，参考一下别人普遍都是用什么做内参做的
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大家相互帮助哈
8楼2013-12-26 22:30:05
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