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我听五月天

木虫 (正式写手)

[求助] 细胞培养过程中培养液变黄 已有11人参与

跟别人要的海拉细胞(DMEM培养的),传代两次后就挂了。期间,拿到细胞第二天就看到细胞轮廓开始变得不清晰、不透亮。之后细胞培养液(都是1640高糖)一天内就变黄,一天早晚换两次。后来轮廓更不清晰、细胞更不透亮。就改用DMEM培养,更换两次培养液后培养液浑浊了,显微镜下的细胞看上去都好像烧过的纸一样。就丢弃了。请教大神们这是什么原因?????
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为爱而生
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sxxuan

金虫 (著名写手)

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我听五月天: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-12-27 17:12:51
hela细胞很皮实很好养的,首先要排除污染问题,支原体/细菌/培养基有没有污染等
哪怕是长过了,也只是细胞状态不好或者太密所以死细胞多,而 不会出现很浑浊然后死掉的情况
曾经试过培养箱没有二氧化碳了但hela还能继续生长,只是慢一些。怀疑培养箱的话可以尝试把二氧化碳量调低一点。
如果是从别的地方拿回来的细胞,也要考虑运输过程有没有染菌,如果是的话,也有可能传代一两次才开始大规模地染菌的
你的日子如何,你的力量也必如何!
12楼2013-12-26 13:55:56
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刘璐19890614

木虫 (小有名气)

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我听五月天: 金币+2, 有帮助 2013-12-27 16:25:49
是不是细胞本身有问题?不是很懂,来长知识的
加油
2楼2013-12-24 09:07:30
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western虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2013-12-24 18:03:06
建议测试一下培养箱的CO2的浓度,后面变浑浊应该是细胞碎片吧,如果是染菌就没的说了。细胞在无污染条件下坏死,建议从理化性质去考虑,比如温度和CO2浓度是否要校正
ForDream!
3楼2013-12-24 12:31:37
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tinytan

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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silicare: 金币+4, 谢谢参与 2013-12-24 18:03:25
1.有无染细真菌?2.细胞传代次数过多?3.培养箱校准?4.操作过于粗放?

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2013-12-24 12:37:28
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