应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » qPCR求助
51/1返回列表
查看: 1078  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wsliuqiulei

铜虫 (初入文坛)

[求助] qPCR求助 已有2人参与

1.扩增曲线的R平方多在90%-95%，请问怎么解决？
2.基因丰度比较低，未经稀释的cDNA模板的ct几乎就在23-26了，请问高手们怎么进行下一步的不同处理间的比较啊？
3.几个基因的扩增效率在100%-105%之间，但是R平方在95%-99%之间，并没有在99%之上，请问这样的扩增效率是否可用？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-12-15 23:17:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

min8717

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

R2只有90到95，线性不好啊！是肯定不行的，至少也要达到两个9以上，既然线性不好了，还谈扩增效率是没什么意义的，要知道扩增效率就是根据斜率计算的来。建议你先测测你的cDNA浓度有多少，我觉得是你的浓度太大了，已经起到抑制扩增了。
赞一下 回复此楼
天助自助者
8楼2014-01-08 10:59:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-17 12:37:59
1. 大于90%已经算是不错的，可能退火温度不是最优，稍微降低一点点试试。
2. 用2倍梯度稀释或者在逆转录时增加RNA的用量。
3. 可以。R^2不够好可能是操作或者其他因素。扩增效率好说明扩增反应的CT与产物浓度有良好的2倍关系，可以用于定量。
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-16 01:42:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wsliuqiulei

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-16 01:42:24
1. 大于90%已经算是不错的，可能退火温度不是最优，稍微降低一点点试试。
2. 用2倍梯度稀释或者在逆转录时增加RNA的用量。
3. 可以。R^2不够好可能是操作或者其他因素。扩增效率好说明扩增反应的CT与产物浓度有良 ...

多谢cicelyzh
还想追加问一下：
1.梯度PCR显示一个基因的一对引物有4个退火温度都是单一的目的条带，你的意思是这4个退火温度在上机时可能会有差异导致R^2在90%-95%吗？
2.逆转录时增加RNA的量与通常情况下加大cDNA的量上机是一样道理吧？
赞一下 回复此楼
3楼2013-12-17 11:14:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-24 23:32:05
引用回帖:
3楼: Originally posted by wsliuqiulei at 2013-12-17 11:14:52
多谢cicelyzh
还想追加问一下：
1.梯度PCR显示一个基因的一对引物有4个退火温度都是单一的目的条带，你的意思是这4个退火温度在上机时可能会有差异导致R^2在90%-95%吗？
2.逆转录时增加RNA的量与通常情况下加大 ...

1. 看扩增效率，一般是随着退火温度提高扩增效率可能下降，在扩增效率符合要求的前提下尽量用温度最高。但有时候为了和其它基因一起做，需要选择较低的退火温度。
2. 目的是相同的。但cDNA的体积在qPCR体系里不能太高，否则逆转录体系里的一些物质会干扰定量。
赞一下 回复此楼
4楼2013-12-17 12:55:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-29 21:22 by 4qO8zhfjr2AX
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:11 by 4qO8zhfjr2AX
[基金申请] 面上意见出来了 +8 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 16/800 2026-08-29 20:45 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-29 20:07 by winsaint
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-29 17:22 by 4FFAWE8HcgUD
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +9 苏东坡二世 2026-08-23 9/450 2026-08-29 14:41 by hustersqt
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 14:03 by jCd0dEvKHShX
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:51 by jCd0dEvKHShX
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-29 11:49 by jCd0dEvKHShX
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:40 by jCd0dEvKHShX
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 11:18 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +3 349506619 2026-08-28 3/150 2026-08-29 10:49 by 木风9012
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭