24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2324  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)


[交流] pUC 19 plasmid作对照的原理及操作

我的PCR产物要做克隆,买了Takara的感受态,里面有一管pUC 19 plasmid,查了说明书说是做对照用的,但没写具体怎么做,对它的原理也不清楚。
所以请各位大虾指点一下,最好从pUC 19 plasmid的结构上给我说明一下:1、它做对照的原理;2、起到什么作用;3、具体如何操作(我的连接液体系是:2.5ul solution  I+2ul 胶回收DNA+0.5ul T-vector,加到50ul感受态细胞中)。
本来就是做分子的新手,现又遇到各种问题,做克隆也是完全自己查资料摸索着做,没有师兄师姐带的菜鸟伤不起啊!
求高手不吝指教!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

小知识

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2013-12-13 18:16:00
您好!
还想问一下,第二个问题:有师兄说pUC 19 plasmid是空质粒,用来做阴性对照的,把我搞糊涂了。第三个问题:您能不能跟我说一下怎么用pUC 19做对照实验吗?
谢谢!...

第三个问题,你得看T Vector的说明书,里面有没有提供片段给你做连接反应的对照,用pUC 19是做不了的,pUC 19的作用上面我已经讲了
6楼2013-12-13 21:48:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
柠檬可乐星: 金币+5 2013-12-14 17:55:58
"买了Takara的感受态,里面有一管pUC 19 plasmid "
1、它做对照的原理;
pUC 19 plasmid是附在感受态里面的,是让你用来测试你买的感受态的效率的,质粒有一定的浓度,你可以取一定量进行转化,然后根据质粒的量和长出的菌落数算出感受态的效率 X cfu。

2、起到什么作用;
就是转化的阳性对照(不是连接的阳性对照)作用,检测感受态的效率,平板的抗性,转化的过程等等

3、具体如何操作(我的连接液体系是:2.5ul solution  I+2ul 胶回收DNA+0.5ul T-vector,加到50ul感受态细胞中)
pUC 19跟你做连接没有关系
2楼2013-12-13 15:18:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happy361

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
2楼说得很专业了。
3楼2013-12-13 18:13:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-13 15:18:13
"买了Takara的感受态,里面有一管pUC 19 plasmid "
1、它做对照的原理;
pUC 19 plasmid是附在感受态里面的,是让你用来测试你买的感受态的效率的,质粒有一定的浓度,你可以取一定量进行转化,然后根据 ...

您好!
还想问一下,第二个问题:有师兄说pUC 19 plasmid是空质粒,用来做阴性对照的,把我搞糊涂了。第三个问题:您能不能跟我说一下怎么用pUC 19做对照实验吗?
谢谢!
4楼2013-12-13 18:16:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕调剂 +4 椰椰。 2026-03-29 4/200 2026-03-29 19:54 by 无际的草原
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +14 Mr. Z 2026-03-25 14/700 2026-03-29 17:27 by 学员8dgXkO
[考研] 349求调剂 +6 李木子啊哈哈 2026-03-25 6/300 2026-03-29 12:47 by 无际的草原
[考研] 348求调剂 +5 小懒虫不懒了 2026-03-28 5/250 2026-03-29 10:34 by 唐沐儿
[考研] 一志愿华东师范大学有机化学专业,初试351分,复试被刷求调剂! +3 真名有冰 2026-03-29 4/200 2026-03-29 08:47 by qingfeng258
[考研] 0856求调剂 +13 zhn03 2026-03-25 14/700 2026-03-29 08:13 by fmesaito
[考研] 071000生物学求调剂,初试成绩343 +7 小小甜面团 2026-03-25 7/350 2026-03-28 20:25 by 唐沐儿
[考研] 266分,求材料冶金能源化工等调剂 +7 哇呼哼呼哼 2026-03-27 9/450 2026-03-28 12:22 by zllcz
[考研] 291求调剂 +15 hhhhxn.. 2026-03-23 21/1050 2026-03-28 11:26 by self2008
[考研] 一志愿南京航空航天大学材料学硕求调剂 +3 @taotao 2026-03-28 3/150 2026-03-28 10:26 by JourneyLucky
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +8 曼111 2026-03-24 9/450 2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 348求调剂 +4 小懒虫不懒了 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:47 by 果果妈咪
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 333求调剂 +3 question挽风 2026-03-23 3/150 2026-03-27 11:29 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 材料/农业专业,07/08开头均可,过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪!?!
信息提示
请填处理意见