24小时热门版块排行榜    

查看: 2518  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)


[交流] pUC 19 plasmid作对照的原理及操作

我的PCR产物要做克隆,买了Takara的感受态,里面有一管pUC 19 plasmid,查了说明书说是做对照用的,但没写具体怎么做,对它的原理也不清楚。
所以请各位大虾指点一下,最好从pUC 19 plasmid的结构上给我说明一下:1、它做对照的原理;2、起到什么作用;3、具体如何操作(我的连接液体系是:2.5ul solution  I+2ul 胶回收DNA+0.5ul T-vector,加到50ul感受态细胞中)。
本来就是做分子的新手,现又遇到各种问题,做克隆也是完全自己查资料摸索着做,没有师兄师姐带的菜鸟伤不起啊!
求高手不吝指教!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

小知识

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happy361

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
2楼说得很专业了。
3楼2013-12-13 18:13:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
柠檬可乐星: 金币+5 2013-12-14 17:55:58
"买了Takara的感受态,里面有一管pUC 19 plasmid "
1、它做对照的原理;
pUC 19 plasmid是附在感受态里面的,是让你用来测试你买的感受态的效率的,质粒有一定的浓度,你可以取一定量进行转化,然后根据质粒的量和长出的菌落数算出感受态的效率 X cfu。

2、起到什么作用;
就是转化的阳性对照(不是连接的阳性对照)作用,检测感受态的效率,平板的抗性,转化的过程等等

3、具体如何操作(我的连接液体系是:2.5ul solution  I+2ul 胶回收DNA+0.5ul T-vector,加到50ul感受态细胞中)
pUC 19跟你做连接没有关系
2楼2013-12-13 15:18:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-13 15:18:13
"买了Takara的感受态,里面有一管pUC 19 plasmid "
1、它做对照的原理;
pUC 19 plasmid是附在感受态里面的,是让你用来测试你买的感受态的效率的,质粒有一定的浓度,你可以取一定量进行转化,然后根据 ...

您好!
还想问一下,第二个问题:有师兄说pUC 19 plasmid是空质粒,用来做阴性对照的,把我搞糊涂了。第三个问题:您能不能跟我说一下怎么用pUC 19做对照实验吗?
谢谢!
4楼2013-12-13 18:16:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongguolang

新虫 (小有名气)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-14 17:56:13
用来做蓝白班斑筛选的阴性对照,
5楼2013-12-13 19:28:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +10 yufeiwaner 2026-08-09 10/500 2026-08-10 13:44 by cdutwml
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +3 布布和一二 2026-08-10 3/150 2026-08-10 13:00 by smlz521
[基金申请] 国自然结果 +3 Vierhys 2026-08-10 5/250 2026-08-10 12:53 by lliang1209
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +10 archvillain 2026-08-04 12/600 2026-08-10 12:45 by yudaoqian88
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +5 家与远方 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:45 by 家与远方
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] FileCode能看出啥? +3 要乐观耀哥 2026-08-10 6/300 2026-08-10 12:33 by 要乐观耀哥
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +12 Lanmanbaby 2026-08-09 20/1000 2026-08-10 11:51 by 要乐观耀哥
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见