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pUC 19 plasmid作对照的原理及操作
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我的PCR产物要做克隆,买了Takara的感受态,里面有一管pUC 19 plasmid,查了说明书说是做对照用的,但没写具体怎么做,对它的原理也不清楚。 所以请各位大虾指点一下,最好从pUC 19 plasmid的结构上给我说明一下:1、它做对照的原理;2、起到什么作用;3、具体如何操作(我的连接液体系是:2.5ul solution I+2ul 胶回收DNA+0.5ul T-vector,加到50ul感受态细胞中)。 本来就是做分子的新手,现又遇到各种问题,做克隆也是完全自己查资料摸索着做,没有师兄师姐带的菜鸟伤不起啊! 求高手不吝指教! |
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gyesang
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柠檬可乐星: 金币+5 2013-12-14 17:55:58
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"买了Takara的感受态,里面有一管pUC 19 plasmid " 1、它做对照的原理; pUC 19 plasmid是附在感受态里面的,是让你用来测试你买的感受态的效率的,质粒有一定的浓度,你可以取一定量进行转化,然后根据质粒的量和长出的菌落数算出感受态的效率 X cfu。 2、起到什么作用; 就是转化的阳性对照(不是连接的阳性对照)作用,检测感受态的效率,平板的抗性,转化的过程等等 3、具体如何操作(我的连接液体系是:2.5ul solution I+2ul 胶回收DNA+0.5ul T-vector,加到50ul感受态细胞中) pUC 19跟你做连接没有关系 |
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gyesang
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