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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[交流] pUC 19 plasmid作对照的原理及操作

我的PCR产物要做克隆，买了Takara的感受态，里面有一管pUC 19 plasmid，查了说明书说是做对照用的，但没写具体怎么做，对它的原理也不清楚。
所以请各位大虾指点一下，最好从pUC 19 plasmid的结构上给我说明一下：1、它做对照的原理；2、起到什么作用；3、具体如何操作（我的连接液体系是：2.5ul solution  I+2ul 胶回收DNA+0.5ul T-vector，加到50ul感受态细胞中）。
本来就是做分子的新手，现又遇到各种问题，做克隆也是完全自己查资料摸索着做，没有师兄师姐带的菜鸟伤不起啊！
求高手不吝指教！
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1楼 2013-12-13 10:42:27
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
柠檬可乐星: 金币+5 2013-12-14 17:55:58
"买了Takara的感受态，里面有一管pUC 19 plasmid "
1、它做对照的原理；
pUC 19 plasmid是附在感受态里面的，是让你用来测试你买的感受态的效率的，质粒有一定的浓度，你可以取一定量进行转化，然后根据质粒的量和长出的菌落数算出感受态的效率 X cfu。

2、起到什么作用；
就是转化的阳性对照（不是连接的阳性对照）作用，检测感受态的效率，平板的抗性，转化的过程等等

3、具体如何操作（我的连接液体系是：2.5ul solution  I+2ul 胶回收DNA+0.5ul T-vector，加到50ul感受态细胞中）
pUC 19跟你做连接没有关系
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2楼2013-12-13 15:18:13
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happy361

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
2楼说得很专业了。
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3楼2013-12-13 18:13:13
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-13 15:18:13
"买了Takara的感受态，里面有一管pUC 19 plasmid "
1、它做对照的原理；
pUC 19 plasmid是附在感受态里面的，是让你用来测试你买的感受态的效率的，质粒有一定的浓度，你可以取一定量进行转化，然后根据 ...

您好！
还想问一下，第二个问题：有师兄说pUC 19 plasmid是空质粒，用来做阴性对照的，把我搞糊涂了。第三个问题：您能不能跟我说一下怎么用pUC 19做对照实验吗？
谢谢！
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4楼2013-12-13 18:16:00
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dongguolang

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
柠檬可乐星: 金币+1 2013-12-14 17:56:13
用来做蓝白班斑筛选的阴性对照，
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5楼2013-12-13 19:28:49
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2013-12-13 18:16:00
您好！
还想问一下，第二个问题：有师兄说pUC 19 plasmid是空质粒，用来做阴性对照的，把我搞糊涂了。第三个问题：您能不能跟我说一下怎么用pUC 19做对照实验吗？
谢谢！...

第三个问题，你得看T Vector的说明书，里面有没有提供片段给你做连接反应的对照，用pUC 19是做不了的，pUC 19的作用上面我已经讲了
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6楼2013-12-13 21:48:59
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yuren2009

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
柠檬可乐星: 金币+2 2013-12-14 17:55:40
你去他们的网站下载说明书就知道了。我做克隆片段就没有做control,这个只是说明你的试剂有没有问题或者操作是否正确。PUC19是对照用的。

[ Last edited by yuren2009 on 2013-12-13 at 22:36 ]
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7楼2013-12-13 22:35:36
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-13 21:48:59
第三个问题，你得看T Vector的说明书，里面有没有提供片段给你做连接反应的对照，用pUC 19是做不了的，pUC 19的作用上面我已经讲了...

好的  谢谢啦
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8楼2013-12-14 17:55:30
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