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[求助]
求助！共表达菌株摇瓶培养总是菌体裂解 已有2人参与
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求助各位师兄师姐，小弟最近做共表达，质粒载体是pET-Duet1，表达宿主是E.coli BL21，载体上插了A和B两个基因，为了考察表达效率构建了A-B和B-A两株菌，但是培养的过程中发现A-B株菌培养和表达均正常，但是B-A株就是怎么养都会裂解，轻则澄清有絮状杂质，重则菌体碎片聚集成团。 附图一张，这是裂解得很严重了  早前是种子液生长正常，转接以后短时间生长正常，加入诱导剂后若干小时就会裂解，到后来连种子也会裂解了…… 之前也在网上看过相应的问题贴，做过下列尝试均无明显改善： 1、划线涂板，重新挑取单克隆，仍然裂解 2、提取质粒重新做转化，仍然裂解 3、分子实验原代质粒做转化，仍然裂解 4、将裂解的培养液滴在长菌的AMP抗性平板上，37度培养过夜无噬菌斑形成 5、质粒测序正确 6、更换抗生素和诱导剂，仍然裂解 小弟已经卡在这里半个月了，求助大家，看看到底是啥原因~ 在此谢过 |
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2楼2013-12-28 15:01:53
reallpf
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