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[求助]
恳请各位帮我分析连接体系是否有问题 已有3人参与
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各位虫友大家晚上好！ 最近一直载体自连，很是着急，发帖向各位求助，万分感激！ 我的连接体系如下： Solution 5 u, pMD 19-T 1 u, DNA 0.65 u, 补足水至10 u 结果载体自连相当严重。 我计算载体与插入片段依据如下（插入片段700 bp,150 ng/u）： 1u载体为0.03pm，载体：插入DNA摩尔比1:2—1:10均可，即插入片段为0.06—0.3pm,按照插入片段使用量（ng）=nmol数*660*插入片段bp数，得出使用量为28ng—138ng,换算成体积是0.187—0.92ul，连接体系中我加0.65uDNA应该是没问题的，请虫友帮我分析分析，为何这么多载体自连，谢谢各位了！ |
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