| 查看: 4056 | 回复: 1 | ||
lihehemumu银虫 (小有名气)
|
[求助]
T4 PNK 和 Ligase 已有1人参与
|
|
实验是这样： 试剂公司合成的DNA两端都是羟基。 我先磷酸化其中一条短ssDNA（A）的5‘，23bases，然后加入另外一条ssDNA（B）15bases，和一个更短的ssDNA（C）10bases，C与A和B都有部分互补，为的是把A和B拉近进行下一步的连接。简单的说就是要把A和B连接成一条长链。 磷酸化用的是thermo T4 PNK，连接用thermo T4 Ligase。 现在问题是连不上，不知道为什么。PNK用37度30min，然后加B和C后杂交2h，再Ligase是22度1h。Buffer用的是PNK的Buffer,跟Ligase相差不大： 10×：500mM Tris-HCl，100mM MgCl2，pH 7.6。 另外除了跑胶，还有别的办法鉴定是否连接上吗？ 求指导！  |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有134人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 如何在切胶回收的DNA片段两端添加P32标记呢？
已经有5人回复
- DNA印迹实验，T4 ligase和切刻内切酶 分别与DNA 反应后跑胶，结果却不理想，求释惑
已经有5人回复
- 平末端连接做不出来克隆
已经有30人回复
2楼2013-12-11 16:12:41
10