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赤兔绝尘

新虫 (初入文坛)

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[求助] 菜鸟求教native-page的两个问题

小弟最近在跑同工酶的native-page，发现结果出来后有几条带，但是条带都连在一起，很难分辨，本人用的浓缩胶4%，分离胶8%~10%，试过6~15%的分离胶，发现差别不大，应该怎么办？还有那个酶的提取液用什么比较好？我试过几种浓度的PBS和Tris-Hcl，都差别不大，最近实验结果出不来，闷得慌，求大神解答~

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1楼 2013-12-08 18:59:28

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alman001

铜虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-09 03:33:09
native-page的分辨率比SDS-PAGE低很正常。一般做nativ-PAGE可以做in-gel酶活检测或者western blot看某一特定的蛋白。你做非变性胶的目的是什么？

我也想做native PAGE，然后做您之后说的in-gel酶活检测，请问您做过后续的酶活检测吗，复杂吗，是不是根据不同酶的催化功能决定的？我想将我的基因做原核表达后纯化蛋白然后跑native-PAGE，之后做酶活检测，这样合理吗？谢谢哈