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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于硕士阶段实验思路的求助（VLPs的制备）
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ccchudi

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于硕士阶段实验思路的求助（VLPs的制备） 已有1人参与

我是做HPV52 L1蛋白的真核表达
但由于目前尚未有商品化的HPV52 L1抗体
因此只能用HPV 16型的抗体进行检测
目前国内很多文献都是用16型的来做WESTERN BLOT
图片看上去的确很好看，特异性很好，干干净净的目的条带
但我们之前做HPV 58的VLP用HPV 16抗体检测效果并不好，有假阳性条带
HPV52只做过一次WB，比58情况略好，但依旧没有文献的图片那么好
（文献图片好看情有可原，呵呵）

因此有人给我提出建议
让我用原核表达目的蛋白片段，做小规模纯化后免疫动物获得抗血清，自己提一些抗体做WB

我隐隐觉得这个办法有点问题
用自己基因片段制备的抗体来检测自己制备的抗原，有说服力么？假设我的L1基因序列由于突变等原因导致了氨基酸的改变，这样获得的抗体依旧有可能与抗原结合，甚至也可能出现WB特异性不好等原因
而且这个圈子似乎绕的有点大，相关的工作量和时间成本也很大

因此想求助大家帮个忙：
1.我这个原核表达做的有意义么
2.如何能降低WB非特异性条带的出现（PS就不用说了）
3.我真核表达出的VLP电镜下总是形态不完整，想试试抑肽酶，大家有用过的么。
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1楼 2013-12-05 19:34:32
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Mornchen

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
ccchudi: 金币+5, ★有帮助 2013-12-12 20:05:56
我们以前师兄师姐答辩的时候，有个老师就说过，用自己的蛋白制备抗体再来证明自己的蛋白，这种是不行的。
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3楼2013-12-11 22:29:39
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