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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌基因突变体功能补偿
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

[求助] 细菌基因突变体功能补偿

请教一个实验问题。
最近敲出了Pseudomonas syringe菌株的一个基因，产生了某些表型变化，想做突变体功能补偿。
请问是否可以把基因的ORF连到带有启动子（如tac promoter）的载体上？如果可以，带有融合标签的表达载体pMEKm12可以用吗？
或者，需要把基因的ORF连同自身启动子一块连到载体上？如果是这样，有哪些载体可以使用呢?

诚谢！！！
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做一个阳光、开朗的小和尚
1楼 2013-12-05 16:41:13
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 咆哮的白菜 at 2013-12-07 17:08:17
要看启动子能不能在菌体内正常启动转录吧，以前有没有人在这个菌种用过这个启动子，文献中如果有人用的话就应该可以吧，没有的话就看文献中别人用的什么载体和启动子，要来自己用

谢谢啦。
有人用此质粒在该菌中做过overexpression，启动子应该能在菌体中正常启动转录。
目前不太清楚的是，做突变体功能补偿时，我应该使用基因本身的启动子，还是像tac启动子这样的，或者两者都行？文献中两种情况都见过。
那么，两种情况下，基因的表达水平应该会有差异，使用哪个更合适呢？
另外，质粒会表达融合标签MBP，不知道会不会有影响？
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做一个阳光、开朗的小和尚
4楼2013-12-07 20:31:24
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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhaozhibozhi: 金币+6, ★★★★★最佳答案, 非常感谢，金币比较少，见谅 2013-12-08 13:11:51
要看启动子能不能在菌体内正常启动转录吧，以前有没有人在这个菌种用过这个启动子，文献中如果有人用的话就应该可以吧，没有的话就看文献中别人用的什么载体和启动子，要来自己用
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姥姥不疼，舅舅不爱
2楼2013-12-07 17:08:17
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhaozhibozhi: 金币+4, 非常感谢，金币比较少，见谅 2013-12-08 13:12:00
如果是使用质粒互补，首先要确保质粒能够在你的材料里面复制；其次就是基因能够正确表达。
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致良知
3楼2013-12-07 19:11:10
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by quiller2000 at 2013-12-07 19:11:10
如果是使用质粒互补，首先要确保质粒能够在你的材料里面复制；其次就是基因能够正确表达。

如果这些不是问题，请问使用外源启动子和自身启动子有什么差异呢？使用自身启动子的话，基因的表达水平会和野生型一致吗？

谢谢啦
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做一个阳光、开朗的小和尚
5楼2013-12-07 20:34:10
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