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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

[求助] 细菌基因突变体功能补偿

请教一个实验问题。
最近敲出了Pseudomonas syringe菌株的一个基因,产生了某些表型变化,想做突变体功能补偿。
请问是否可以把基因的ORF连到带有启动子(如tac promoter)的载体上?如果可以,带有融合标签的表达载体pMEKm12可以用吗?
或者,需要把基因的ORF连同自身启动子一块连到载体上?如果是这样,有哪些载体可以使用呢?

诚谢!!!
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做一个阳光、开朗的小和尚
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 咆哮的白菜 at 2013-12-07 17:08:17
要看启动子能不能在菌体内正常启动转录吧,以前有没有人在这个菌种用过这个启动子,文献中如果有人用的话就应该可以吧,没有的话就看文献中别人用的什么载体和启动子,要来自己用

谢谢啦。
有人用此质粒在该菌中做过overexpression,启动子应该能在菌体中正常启动转录。
目前不太清楚的是,做突变体功能补偿时,我应该使用基因本身的启动子,还是像tac启动子这样的,或者两者都行?文献中两种情况都见过。
那么,两种情况下,基因的表达水平应该会有差异,使用哪个更合适呢?
另外,质粒会表达融合标签MBP,不知道会不会有影响?
做一个阳光、开朗的小和尚
4楼2013-12-07 20:31:24
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咆哮的白菜

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhaozhibozhi: 金币+6, ★★★★★最佳答案, 非常感谢,金币比较少,见谅 2013-12-08 13:11:51
要看启动子能不能在菌体内正常启动转录吧,以前有没有人在这个菌种用过这个启动子,文献中如果有人用的话就应该可以吧,没有的话就看文献中别人用的什么载体和启动子,要来自己用
姥姥不疼,舅舅不爱
2楼2013-12-07 17:08:17
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhaozhibozhi: 金币+4, 非常感谢,金币比较少,见谅 2013-12-08 13:12:00
如果是使用质粒互补,首先要确保质粒能够在你的材料里面复制;其次就是基因能够正确表达。
致良知
3楼2013-12-07 19:11:10
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by quiller2000 at 2013-12-07 19:11:10
如果是使用质粒互补,首先要确保质粒能够在你的材料里面复制;其次就是基因能够正确表达。

如果这些不是问题,请问使用外源启动子和自身启动子有什么差异呢?使用自身启动子的话,基因的表达水平会和野生型一致吗?

谢谢啦
做一个阳光、开朗的小和尚
5楼2013-12-07 20:34:10
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