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zhaozhibozhi金虫 (正式写手)
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细菌基因突变体功能补偿
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请教一个实验问题。 最近敲出了Pseudomonas syringe菌株的一个基因，产生了某些表型变化，想做突变体功能补偿。 请问是否可以把基因的ORF连到带有启动子（如tac promoter）的载体上？如果可以，带有融合标签的表达载体pMEKm12可以用吗？ 或者，需要把基因的ORF连同自身启动子一块连到载体上？如果是这样，有哪些载体可以使用呢? 诚谢！！！ |
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2楼2013-12-07 17:08:17
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5楼2013-12-07 20:34:10
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用所谓的native promoter是最好的，既然有人在此菌株中用过这个启动子做过过表达实验，说明这是一个强启动子，强启动子的特点应该是所有时间段或生长阶段的强力且持续的表达，做功能补偿应该是可以。但是为什么native的更好，是因为native promoter并不一定是个强启动子，它可能会在不同的时间有不同的表达量，这种情况是和敲掉以前的基因表达基本一致的，基本不会有其他影响；如果你用外源的强启动子，补偿的基因持续表达，相对于原始的基因表达水平就会有差异，比如在X时期，原始基因是没有表达的而外源启动子却还是一直表达，所以有了差异可能就会有其他影响，native promoter就没这个问题了。 |
6楼2013-12-08 12:55:06
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