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HPLC方法测量拟南芥幼苗ABA遇到的问题
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诸位大侠: 最近我在提取测量5天的拟南芥幼苗中的ABA,提取方法大致就是用80%的甲醇(含有10mg/L的抗氧剂)直接研磨0.5或1g的材料,提取液和研钵都预冷了。大约用了10ml的浸提液,第一次直接放在4度冰箱里过夜,也试过用超声波超声30min后再放到冰箱里。过夜后离心收集上清液。之后的纯化方法各种都试过,最近一次没有做纯化,直接上冷冻干燥机蒸干,用流动相(v甲醇:v水(含1%乙酸)=4:6)复溶,上HPLC测量。提取了三次,测了三次,每次标准品都有单一的峰大约17分钟多点,样品有杂峰,可就是在14分钟后再也没峰了,不知道哪出问题了。 想请教各位做过的,在提取的时候有什么需要注意的细节问题,比如研磨的时候需要弱光?4度浸提的时候需要一直摇晃?如果不做纯化,蒸干后直接做HPLC,如果有ABA,其他杂质应该不会干扰吧。 还想请教各位,现在想发表好点的SCI文章,测ABA比较好的方法包括Elisa方法吗?谢谢! |
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lp_0820
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