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donggualily

金虫 (正式写手)

[求助] DGGE的电压与电流应该设多少? 已有2人参与

我是DGGE新手,按前辈们的建议,跑了个低电压长时间的DGGE电泳,目的序列470bp,75V,16h,40%-60%的变性梯度(做过垂直胶的梯度优化),胶浓度8%。可是等到电泳结束后染色才发现,大部分条带跑出去了,剩在胶里的条带也没有弯曲变形什么的,只不过所剩无几了,于是胶上半部分空白。求助各位高手,为何这么低的电压,16个小时还是跑出胶?是不是电流太大?电流应该多大才合适?如何改进实验呢?另外,请教470bp的序列应该是用8%的胶浓度还是6%?万分感谢!
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yht5657

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ppdgge at 2014-04-01 23:05:34
你这8%  10% 什么意思?...

胶浓度8%
付出才有可能有回报。
5楼2014-04-02 08:45:05
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donggualily

金虫 (正式写手)

高手在哪里啊?自己顶!
2楼2013-12-04 15:52:23
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yht5657

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-11 23:37:03
donggualily: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢应助! 2014-01-17 12:39:13
电压乘以电泳时间(h)的乘积等于1000是最好的。
6% ------300~1000bp
8%-------200~400bp
10%-----100~300bp
所以200~400bp的三个都试试,大于400bp的估计先试试6%的吧。
付出才有可能有回报。
3楼2014-01-11 10:22:01
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ppdgge

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yht5657 at 2014-01-11 10:22:01
电压乘以电泳时间(h)的乘积等于1000是最好的。
6% ------300~1000bp
8%-------200~400bp
10%-----100~300bp
所以200~400bp的三个都试试,大于400bp的估计先试试6%的吧。

你这8%  10% 什么意思?
4楼2014-04-01 23:05:34
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