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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 质谱分析 » 关于MRM方法测定血药浓度时内标曲线的绘制问题
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gruyclewee

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[求助] 关于MRM方法测定血药浓度时内标曲线的绘制问题 已有1人参与

本人近来看了一些关于MRM测定血液、血浆或者尿液等人体液中药物浓度的文献。

采用的方法一般都是用LC-MS/MS的MRM模式进行采集，然后一般都会加入内标进行校正。

有一个问题一直都困惑着我，我看这些文章绘制标准校正曲线的时候有两种方式：

（1）一种是将测的药物标准品和内标加到不含该药物的空白血浆/尿液中，然后用MRM采集数据，用药物的峰面积对内标的峰面积之比vs药物浓度作标准曲线。然后计算其线性范围等等。

（2）另外一种方式是要测的药物标准品和内标不加到不含该药物的空白血浆/尿液中（即不加到基质中），直接用水或者流动相溶解，然后用MRM采集数据，用药物的峰面积对内标的峰面积之比vs药物浓度作标准曲线。然后计算其线性范围等等。

两种方法的不同之处就是做标准曲线的时候，需不需要将标准品和内标加到基质中，然后采集数据，做标准曲线。

请问这两种方法有什么不同？那一种更好？通常用的是哪种方法？

谢谢！

[ Last edited by gruyclewee on 2013-12-3 at 11:17 ]
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1楼 2013-12-03 11:14:07
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akosrios

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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suruiqin: 金币+1, 感谢交流，辛苦了~ 2013-12-03 14:05:13
gruyclewee: 金币+8, ★★★很有帮助, 感谢解答，谢谢！ 2013-12-04 00:30:18
第一种是外标法，第二种的标准加入法，在测定血浆、污水等，为了避免基质效应，采用第二种的较多一些
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中华人民共和国公民有言论、出版、集会、结社、游行、示威的自由。---中国人民共和国宪法二章三十五条
2楼2013-12-03 11:53:49
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普通回帖

gruyclewee

荣誉版主 (文坛精英)

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引用回帖:
2楼: Originally posted by akosrios at 2013-12-03 11:53:49
第一种是外标法，第二种的标准加入法，在测定血浆、污水等，为了避免基质效应，采用第二种的较多一些

但是除了是否加入到基质中这个区别外，其他的都没有区别。

没有加到基质里面也采用了内标物质的。

外标法通常是不需要内标物质的吧。

而且这两种方法我都是在测定血药浓度的文献里面看到的。
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竹杖芒鞋轻胜马，一蓑烟雨任平生。
3楼2013-12-03 11:56:53
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akosrios

铁杆木虫 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gruyclewee at 2013-12-03 11:56:53
但是除了是否加入到基质中这个区别外，其他的都没有区别。

没有加到基质里面也采用了内标物质的。

外标法通常是不需要内标物质的吧。

而且这两种方法我都是在测定血药浓度的文献里面看到的。...

关键不在于加不加内标物，在于加不加基质；有些基质会影响样品的响应的
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4楼2013-12-03 12:53:01
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gruyclewee

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4楼: Originally posted by akosrios at 2013-12-03 12:53:01
关键不在于加不加内标物，在于加不加基质；有些基质会影响样品的响应的...

加内标的主要目的就是为了克服基质干扰吧。

所以，在我看来，外标和内标的区别在于加不加内标物质，分析化学里面不就是这么定义的么？

我上面提到的上个方法作标准曲线的方法都属于内标法吧。但是可以说一个是标准加入，另外一个不是标准加入。

我的问题是，不在于内标外标法与标准加入法的问题。因为这两种方法都是内标法。我想知道为什么有的用标准加入，有的不用标准加入。这两种方法都是在测定血浆中药物的文献中看到的。
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5楼2013-12-03 14:22:50
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akosrios

铁杆木虫 (知名作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gruyclewee at 2013-12-03 14:22:50
加内标的主要目的就是为了克服基质干扰吧。

所以，在我看来，外标和内标的区别在于加不加内标物质，分析化学里面不就是这么定义的么？

我上面提到的上个方法作标准曲线的方法都属于内标法吧。但是可以说一个 ...

加内标无法克服基质干扰。
内标主要用来校正进样量，汽化程度等影响因素。

标加法法是用来克服基质干扰的，假设基质对样品有一定比例吸附，就需要在标样里也加入基质以平衡基质吸附，而单纯加内标是无法平衡这方面的影响的。

楼主提到的方法二，样品是在基质环境中，而标样是在水或者流动相中，这种情况下，如果基质有吸附，无论是外标还是内标，都无法准确测定，而只能采用方法一
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6楼2013-12-03 14:29:06
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

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release53: 金币+1, 辛苦了 2013-12-03 15:40:14
gruyclewee: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 感谢解答，谢谢！ 2013-12-04 00:28:51
1、在常规实验中，应该使用基质去配制标准曲线，国外好多文献都是用基质去配的，不管加入内标是克服基质效应也罢，还是跟踪回收率问题也罢，个人认为基质标准更能真实的反应样品与仪器，与标准之间的关系。
2、好多中文文献均使用标准溶液去绘制标准曲线，个人认为这是仪器的标准曲线，反应的是标准与仪器间的线性范围，而与样品关系不大。这个不推荐。如果解释不清楚的话，可以参考仪器精密度和方法精密度之间的关系和差别。乱说一通，如有问题，请别见笑。
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7楼2013-12-03 14:34:32
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gruyclewee

荣誉版主 (文坛精英)

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引用回帖:
7楼: Originally posted by wyy080214 at 2013-12-03 14:34:32
1、在常规实验中，应该使用基质去配制标准曲线，国外好多文献都是用基质去配的，不管加入内标是克服基质效应也罢，还是跟踪回收率问题也罢，个人认为基质标准更能真实的反应样品与仪器，与标准之间的关系。
2、好多 ...

恩，我也赞同你的看法，在基质中配制标准曲线，应该更能够接近真实情况。

我看很多国外的文献都是把标样加到不好待测物的基质中绘制内标曲线。但是他们所测的药物一般都是病人含有的，健康人血浆中是没有的，所以他可以把待测的药物标准品加到健康人的血浆中来模拟病人血浆中药物的情况来绘制标准曲线，这个固然很好，我非常理解。

但是我有个问题，比如血浆，如果我测的物质本身在血浆中就是含有的，那就意味着我们并不能获得不含该药物的空白血浆，那么该怎么做呢？
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竹杖芒鞋轻胜马，一蓑烟雨任平生。
8楼2013-12-03 15:03:52
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by gruyclewee at 2013-12-03 15:03:52
恩，我也赞同你的看法，在基质中配制标准曲线，应该更能够接近真实情况。

我看很多国外的文献都是把标样加到不好待测物的基质中绘制内标曲线。但是他们所测的药物一般都是病人含有的，健康人血浆中是没有的，所 ...

进行空白检测，然后进行空白扣除
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9楼2013-12-03 15:11:40
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zhychen2008

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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gruyclewee: 金币+8, ★★★很有帮助, 感谢解答，谢谢！ 2013-12-04 00:29:30
生物样品的测定需要使用基质来配置标准溶液，经过处理后，进行测定。
其实就算非生物样品，也是要加入相应的空白辅料处理后进行测定的。
不然，测定的线性能用来做神马用呢
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Yesterday.Today,Tomorrow！
10楼2013-12-03 21:29:39
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